论文部分内容阅读
本研究通过体外模拟瘤胃内环境，利用取自崂山奶山羊瘤胃内的混合厌氧真菌为菌种，研究不同碳源和氮源对瘤胃真菌发酵产纤维素降解酶的影响，筛选出产酶活性最高的培养基组成，并分别对各碳源组底物干物质的消失率及各氮源组发酵液的pH变化进行研究。然后利用筛选得到的最佳培养基，进行扩大培养，利用硫酸铵盐析法获得固体粗酶，并对粗酶制剂的最适温度和最适pH进行研究;最后利用所得粗酶粉处理玉米叶，确定粗酶制剂的最适添加量。整个试验分三部分进行。
1.试验1采用单因素试验设计研究不同碳源（花生蔓、地瓜蔓、豆荚、玉米叶、滤纸）和不同氮源（酵母膏、蛋白胨、尿素、氯化铵、硫酸铵）对瘤胃真菌发酵产纤维素降解酶（羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶）的影响。试验结果表明，花生蔓底物组除木聚糖酶的最高酶活低于豆荚组外，羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶的最高酶活均为最高，分别比第二位的地瓜蔓组高出25.00％(P＜0.05)和14.67％(P＜0.05);氮源组中以蛋白胨组的3种纤维素降解酶活性为最高，分别达到0.835U/mL、4.663U/mL、0.927U/mL，与其它氮源组相比差异显著（P＜0.05）。综上所述，最佳碳源和氮源分别为花生蔓和蛋白胨。
试验还对各碳源组底物干物质的消失率及各氮源组发酵液的pH变化进行了研究。结果表明，发酵120h后，花生蔓、地瓜蔓和玉米叶组的干物质消失率均达到37％左右，显著高于豆荚底物组和滤纸底物组(P＜0.05);各氮源组pH随着时间增长逐渐下降，其中以酵母膏组和尿素组下降最为明显，与另外3个氮源组相比差异显著(P＜0.05）。
2.试验2则利用筛选得到的最佳培养基进行扩大培养，发酵液经硫酸铵盐析后，将得到的粗酶沉淀烘干成粗酶粉，并对粗酶粉的最适温度和最适pH进行研究。结果表明，发酵液的最佳硫酸铵盐析饱和度为65％;得到的木聚糖酶活得率为53.36％，羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶的酶活得率较低，仅为16.81％和15.49％;粗酶的最适温度范围为40～50℃，最适pH范围为5.0～6.8。
3.试验3采用封口袋法将稀释后的粗酶粉按不同比例(0，1‰，2‰，3‰，4‰and5‰)添加到玉米叶中，研究酶粉对玉米叶中干物质(DM)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)消失率的影响以及对粗蛋白(CP)和真蛋白(TP)含量变化的影响。结果表明，当粗酶粉的添加量为4‰时，玉米叶中DM、NDF、ADF的消失率均达最高，分别为26.51％、24.93％和17.31％，与对照组相比差异显著(P＜0.05);粗蛋白和真蛋白的含量也显著高于对照组(P＜0.05)，分别为25.56％和21.94％。综上所述，本试验中该粗酶制剂的最适添加量为4‰。