目的:通过采用胎牛血清(FBS)诱导的HepG2细胞和棕榈酸(PA)诱导的LO2细胞制备非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型,检测青砖茶水提物(QZT)对非酒精性脂肪肝细胞中脂质沉积及对脂肪生成信号通路mi R-33b-SREBP1c/FAS表达的影响,以此来研究QZT防治非酒精性脂肪肝细胞脂肪变性的分子作用机制。方法:(1)以HepG2细胞为研究对象建立NAFLD细胞模型,给予不同浓度的FBS培养48h,CCK-8法测定细胞活性,结合油红O染色,细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的测定,来确定制备NAFLD细胞模型的最佳FBS浓度。(2)为了观察QZT对HepG2细胞脂肪变性的影响,加入不同浓度QZT给药处理24h。CCK-8法检测不同浓度QZT对细胞增殖的影响;随后将细胞分为5组,分别是正常对照组,模型组,QZT低、高剂量组,阳性药物组,通过油红O染色观察细胞脂肪变性的程度,利用酶法检测TG和TC的含量变化,q PCR检测细胞内mi R-33b及SREBP1c m RNA的表达情况,Western blot检测脂质代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)、脂肪酸合成酶(FAS)的表达水平。(3)以LO2细胞为研究对象建立NAFLD细胞模型,给予不同浓度的PA培养24h,MTT法测定细胞活性,结合油红O染色,细胞内甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的测定,来确定制备NAFLD细胞模型的最佳PA浓度。(4)为了观察QZT对LO2细胞脂肪变性的影响,加入不同浓度QZT给药预处理24h。MTT法检测不同浓度QZT对细胞增殖的影响;随后将细胞分为5组,分别是正常对照组,模型组,QZT低、高剂量组,阳性药物组,通过油红O染色观察细胞脂肪变性的程度,利用酶法检测TG、ALT、AST的含量变化。(5)通过q PCR检测各组细胞内mi R-33b及SREBP1c m RNA、FAS m RNA的表达情况,细胞转染mi R-33b mimicis及inhibitor等化学片段,通过Western blot检测下游蛋白SREBP1c的表达情况来研究QZT影响LO2细胞脂肪变性的分子机制。结果:(1)含有50%FBS的培养基诱导HepG2细胞48h可致脂肪变性,成功建立NAFLD细胞模型。(2)QZT的浓度超过240μg/m L时对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,结合预实验取60μg/m L为QZT低剂量组,240μg/m L为QZT高剂量组;QZT处理细胞模型后结果显示,模型组细胞TG、TC含量显著升高,mi R-33b的表达降低,SREBP1c和FAS的表达增加;而QZT作用于HepG2细胞模型后能显著减轻细胞脂肪变性的程度(P<0.01),显著降低TG、TC的含量(P<0.01),增加mi R-33b,降低SREBP1c m RNA的表达水平,同时下调SREBP1c、FAS蛋白表达(P<0.01)。(3)0.4mmol/L的PA培养LO2细胞24h可成功建立NAFLD细胞模型。(4)QZT的浓度超过200μg/m L时对LO2细胞的增殖有明显的抑制作用,结合预实验取50μg/m L为QZT低剂量组,200μg/m L为QZT高剂量组;QZT预处理细胞模型结果显示,模型组细胞TG、ALT和AST含量显著升高,而QZT预处理LO2细胞模型后能有效减轻细胞脂肪变性的程度(P<0.01),TG、ALT和AST的含量显著降低(P<0.01)。(5)模型组细胞内mi R-33b的表达显著降低,SREBP1c、FAS表达显著增高,而QZT预处理之后显著上调mi R-33b,下调SREBP1c m RNA、FAS m RNA的表达水平;PA或mi R-33b inhibitor能够增加LO2细胞中SREBP1c的表达,而应用mi R-33b mimics能够减少由PA引起的SREBP1c表达的增加。结论:青砖茶水提物可通过上调mi R-33b,下调SREBP1c和FAS的表达来影响脂质生成从而降低TG的水平,通过mi R-33b-SREBP1c-FAS途径对NAFLD细胞起到防治作用。