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目的:
胃癌是常见恶性肿瘤,它的发生显示出明显的地理差异。在北美和欧洲,胃癌为少见肿瘤之一,在日本、韩国、中国等地区胃癌发病率很高。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率居各类肿瘤的第二位,发病和死亡人数约占全世界胃癌总数的50%。胃癌的早期发现比较困难,多数患者在确诊时已为进展期,而进展期胃癌即使实施了根治手术和术后辅助化疗,仍有40%-60%的患者发生复发转移。肿瘤的发展通常与细胞表面糖蛋白有关,例如癌胚抗原,糖类抗原199(CA199)可以检测肿瘤患者的肿瘤状态。蛋白质糖基化主要分为2种类型:N-糖基化和O-糖基化。O-糖基化被认为与肿瘤细胞粘附分子的绑定,侵袭,转移以及分化等有关。
GalNAc-Ts(UDP-GalNAc-polypeptide N-acetyl-galactosaminyl transferases)是催化细胞表面蛋白发生粘蛋白型O-糖基化的始动酶,它与恶性肿瘤粘附、侵袭、转移及胞内信号转导密切相关。GalNAc-T3是GalNAc-Ts家族的重要成员。广泛表达于人类正常组织及恶性肿瘤中,国外研究显示:GalNAc-T3与肿瘤的分化、侵袭转移及预后关系密切。
GalNAc-Ts在胃癌中的表达及其与临床病理因素和生存的关系在国内尚无报道,值得进一步研究。
本研究应用免疫组化SP法,检测GalNAc-T3在胃癌中的表达情况,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及对生存的影响,旨在探讨GalNAc-T3在胃癌组织中的表达及其临床意义。
材料和方法:
一、组织标本
中国医科大学附属第一医院2006年4月至2011年10月行胃癌D2根治手术切除的胃癌组织标本65例,术前未行放疗、化疗及免疫治疗。术后均行标准辅助治疗。其中男性48例,女性17例。年龄27岁~78岁,中位年龄57岁。胃癌Lauren分型,肠型31例,弥漫型34例;胃癌分期采用美国癌症联合委员会(AJCC)第7版分期标准,其中T1为1例,T2为8例,T3为13例,T4为43例;发生淋巴结转移56例;Ⅱ期患者13例,Ⅲ期患者52例。随访开始时间为手术当日,截止时间为2012年8月,中位随访时间是671天,65患者以电话随访的方式全部完成了随访,随访率为100%,死亡18例,存活47例,死亡率27.2%。
二、试剂
兔抗人GalNAc-T3多克隆抗体购自SIGMA公司;SP检测试剂盒及DAB显色液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。
三、方法
将65例胃癌组织蜡块连续切片,采用免疫组化SP法,按照SP检测试剂盒说明书所示步骤进行。
四、免疫组化结果判断GalNAc-T3均以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色。每张切片有2位读片者分别阅片,2位读片者一致率超过95%,读片者不了解相应的临床资料。于400倍视野下随机选取5个不同视野,每个视野得分由阳性细胞比例和显色强度决定。阳性细胞比例:≤25%为0分、26~50%为1分,51~75%为2分,≥76%为3分;显色强度:未着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。两项分数乘积为该视野得分,5个视野分数的平均值为最后得分。最后按得分划分等级:0~1分(-),2~4分(+),5~7分(++),≥8分(+++)。(-)和(+)为阴性,(++)和(+++)为阳性。
五、统计分析
以SPSS20.0软件进行统计分析,GalNAc-T3的表达与临床病理因素之间的关系应用x2检验;浸润深度与GalNAc-T3之间的关系采用二元Logistic回归分析;GalNAc-T3的表达与生存时间的关系采用Kaplan-Meier生存率曲线及Log-rank检验。以双侧P<0.05为差异有统计学意义。
实验结果:
一、 GalNAc-T3在胃癌组织中的表达在65例胃癌标本中有30例GalNAc-T3表达,阳性率为46.2%。
二、GaINAc-T3的表达与临床及病理因素之间的关系GalNAc-T3表达与性别、淋巴结转移及临床分期等病理因素无显著相关性(P>0.05)。
GalNAc-T3表达与年龄(P<0.01)、侵袭深度(P<0.05)、分化程度(P<0.01)呈正相关性,该相关性具有统计学意义。
Logistic回归分析提示GalNAc-T3表达是侵袭深度的独立预测因子(P<0.05)。
三、GalNAc-T3的表达与生存的关系GalNAc-T3表达阳性的患者显示出缩短的总生存趋势,但不具有统计学意义(P=0.38)。
结论:
1.GalNAc-T3表达与年龄(P<0.01)、侵袭深度P<0.05)、分化程度(P<0.01)呈正相关性,该相关性具有统计学意义。
2.GalNAc-T3表达是侵袭深度的独立预测因子(P<0.05)。
3.GalNAc-T3表达阳性的患者显示出缩短的总生存趋势,但不具有统计学意义(P=0.38)。
由此,我们可以推测,GalNAc-T3可能作为胃癌分化、侵袭的预测指标。