黑水虻的人工养殖及黑水虻幼虫携带猪瘟病毒与伪狂犬病毒的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:simon_dai
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黑水虻(Hermetia illucens L)是一种分布广泛的食腐性昆虫,其幼虫主要以动物粪便、餐厨垃圾及腐烂的有机物为食,能够集约化地处理畜禽粪便。处理粪便后的黑水虻幼虫含有大量的蛋白质、粗脂肪等,可加工生产为高质量的动物蛋白饲料。目前黑水虻难以规模化养殖,由于黑水虻的养殖技术不够成熟。研究和优化黑水虻养殖技术,实现黑水虻规模化养殖能有效缓解当今猪粪对环境污染问题。本论文以黑水虻幼虫为研究对象,通过猪粪与水粪作为昆虫饲料养殖不同日龄的幼虫,进而研究猪粪与水粪的添加比例对黑水虻幼虫的增重、粪虫比和转化率的影响。以猪饲料、麸皮、发酵豆粕等作为营养添加剂,在猪粪与水粪中添加不同比例养殖黑水虻,比较不同营养添加剂对黑水虻转化猪粪与水粪的效果。虫粪比为1:1.5添加新鲜猪粪和3%发酵豆粕养殖黑水虻,所得出的粪虫比为6.03:1。虫粪比为1:0.8添加水粪和7.5%发酵豆粕养殖黑水虻,所得出幼虫的粪虫比为6.14:1。虫粪比为1:2添加猪粪和25%麸皮养殖黑水虻,所得出的粪虫比为9.8:1。虫粪比为1:3添加猪粪和20%猪饲料养殖黑水虻,所得出的粪虫比为6.19:1。虫粪比为1:1添加猪粪和25%发酵豆粕养殖黑水虻幼虫,所得出的粪虫比为5.08:1。因此,虫粪比为1:1.5添加猪粪和3%发酵豆粕,虫粪比为1:1、1:2添加猪粪和25%发酵豆粕,虫粪比为1:3添加猪粪和猪饲料10%、20%,虫粪比为1:0.8添加水粪和7.5%发酵豆粕等配方养殖黑水虻幼虫,对提高幼虫的增重、粪虫比和转化率有显著的效果。为了探索猪瘟病毒与伪狂犬病毒在黑水虻幼虫体内的变化,黑水虻幼虫分别以单次注射、单次口服PRV、CSFV与多次口服PRV等方式进行接种实验。PRV与CSFV接种后的黑水虻幼虫分别利用PCR与RT-PCR检测病毒核酸,检测分析幼虫携带PRV与CSFV的时间差异。20 g黑水虻幼虫单次注射PRV,每条幼虫注射2μL PRV后空腹,30 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行PCR检测。结果显示,25 h的黑水虻幼虫在330 bp处有特异性条带,大小与目的基因条带相符。单次口服PRV组加入1 m L PRV和PBS 15 m L饲养20 g黑水虻,1 h后将黑水虻清洗干净后空腹,27 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行PCR检测。结果显示,22 h的黑水虻幼虫在330 bp处有特异性条带,大小与目的基因条带相符。单次口服PRV加饲料组加入1 m L PRV、5 g饲料和PBS 15 m L饲养20 g黑水虻,1 h后将黑水虻清洗干净后空腹,22 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行PCR检测。结果显示,14 h的黑水虻幼虫在330 bp处有特异性条带,大小与目的基因条带相符。多次口服PRV组加入25 g饲料、5 m L PRV和PBS 45 m L饲养100 g黑水虻,其后每间隔8 h分别收集5条幼虫和3 g虫渣进行PCR检测,每间隔72 h重复添加病毒与饲料,病毒添加4次后,收集的虫渣在330 bp处有特异性条带,大小与目的基因条带相符;收集的黑水虻幼虫在330 bp处均未出现特异性条带。15 g黑水虻幼虫单次注射CSFV,每条幼虫注射2μL CSFV后空腹,17 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行RT-PCR检测。结果显示,9 h的黑水虻幼虫在343 bp处有特异性条带,大小与目的基因条带相符。单次口服CSFV组加入1 m L CSFV和PBS 15 m L饲养15 g黑水虻,1 h后将黑水虻清洗干净后空腹,12 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行RT-PCR检测。结果显示,12 h内所收集的幼虫在343 bp处均未出现特异性条带。单次口服CSFV加饲料组加入1 m L CSFV、饲料5 g和PBS 15 m L饲养15 g黑水虻,1 h后将黑水虻清洗干净后空腹,10 h内每间隔1 h收集5条幼虫进行RT-PCR检测。结果显示,10 h内所收集的幼虫在343 bp处均未出现特异性条带。PRV肌注组、口服病毒液组和口服病毒液加饲料组所收集幼虫样品的PCR结果表明,通过以上3种方式黑水虻幼虫携带PRV的时间分别为25小时、22小时和14小时。CSFV肌注组、口服病毒液组和口服病毒液加饲料组所收集幼虫样品的RT-PCR结果表明,通过以上3种方式黑水虻幼虫携带CSFV的时间分别为9小时、0小时和0小时。黑水虻幼虫4次口服PRV与单次口服CSFV,虫体内也不携带病毒。
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