【摘 要】
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背景卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）是指是卵母细胞的数量减少和质量降低从而导致生育力下降,目前尚无明确的诊断标准。微小RNA（micro RNA,miRNA）参与卵巢的多种生理病理过程如卵泡的形成和闭锁、颗粒细胞的功能、多囊卵巢综合征（PCOS）以及早发性卵巢功能不全（POI）等。但miRNA在卵巢储备功能减退中的病理生理机制尚未完全明确。目的鉴定卵
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背景卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）是指是卵母细胞的数量减少和质量降低从而导致生育力下降,目前尚无明确的诊断标准。微小RNA（micro RNA,miRNA）参与卵巢的多种生理病理过程如卵泡的形成和闭锁、颗粒细胞的功能、多囊卵巢综合征（PCOS）以及早发性卵巢功能不全（POI）等。但miRNA在卵巢储备功能减退中的病理生理机制尚未完全明确。目的鉴定卵巢储备功能减退年轻女性颗粒细胞中的差异表达miRNA谱,分析相应的靶基因和信号通路,在体外实验中深入研究关键的差异表达的miRNA对人卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡、细胞周期的影响及其与相关基因的互作关系,为卵巢储备功能减退的病理机制提供新的分子理论基础。材料与方法分别对采集的卵巢储备功能减退以及正常卵巢储备的的年轻女性的颗粒细胞行NGS测序分析其差异miRNA表达谱,使用生物信息学技术预测靶基因及功能。在人卵巢颗粒细胞中转染miR-140-3p mimics或inhibitor,颗粒细胞增殖能力通过CCK8法检测,流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,实时定量荧光聚合酶链式反应检测RNA的表达水平,蛋白免疫印迹分析蛋白的表达水平,双荧光素酶报告基因实验研究miRNA与靶基因m RNA的靶向互作关系。结果（1）NGS测序分析卵巢储备功能减退年轻女性的颗粒细胞,鉴定出100种表达差异的miRNA,包括79种miRNA上调及21种miRNA下调（P＜0.05）。（2）通过RT-PCR验证了在年轻DOR女性的卵巢颗粒细胞中,miR-140-3p水平显著上调（P＜0.05）。（3）转染miR-140-3p mimics抑制卵巢颗粒细胞细胞增殖,并诱导S期阻滞。（4）miR-140-3p通过结合DAZAP2的m RNA3’非编码端而抑制DAZAP2的在转录水平及蛋白水平的表达。miR-140-3p抑制ADAM17在转录水平的表达以及影响蛋白水平的糖基化修饰。结论miR-140-3p在年轻DOR患者卵巢颗粒细胞中的表达显著升高,miR-140-3p抑制卵巢颗粒细胞增殖,并诱导细胞周期S期阻滞。miR-140-3p能直接结合靶基因DAZAP2的m RNA的3’UTR,抑制DAZAP2的表达。miR-140-3p抑制ADAM17的表达,从而在卵巢储备功能的病理机制中具有潜在的调控功能。
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