目的随着社会经济的发展,环境污染、心理压力、生活方式等诸多因素可在较大程度上影响人类生殖能力,导致自然流产的发生率居高不下。据统计自然流产的发病率达10%-15%,是目前临床常见的妊娠并发症之一,困扰着越来越多的育龄人群。本研究对传统细胞遗传学及分子细胞遗传学技术进行优化改进从而提高流产组织核型分析的成功率。通过对本研究中收集到的流产组织进行遗传分析,探讨胚胎染色体异常与流产的关系,为流产患者寻找病因,并为其后续遗传咨询提供依据。方法收集2013年3月至2019年10月到洛阳市中心医院进行人工流产或送检自然流产标本,并对其进行遗传学分析。本项目研究所涉及的遗传分析方法包括细胞遗传学分析法和分子细胞遗传学分析法。共对994例流产胚胎样本进行细胞遗传学分析,对59例流产胚胎样本进行分子细胞遗传学分析。对上述千余例病例进行统计,研究流产胚胎样本中出现了何种染色体异常以及这些染色体异常出现的概率。进一步,我们比较分析了自然妊娠和辅助生殖这两种不同的生殖方式之间、不同年龄分组之间、不同胚胎性别之间以及不同核型分析方法之间染色体异常发生的概率是否存在差异,以此探讨染色体异常的出现是否与生殖方式相关、母体年龄、胚胎性别以及核型分析方法等因素相关。根据不同的核型分析结果制定相应的遗传咨询方案,对流产患者进行指导。结果1.本研究共对994例流产组织进行染色体核型分析,共检出异常核型488例,占49.1%。其中染色体数目异常456例,以非整倍体最为常见。检出了单体、除1号染色体之外的各号染色体的三体以及双重三体,多三体、假二倍体、嵌合体等非整倍体核型,共375例;同时也检出了三倍体、近三倍体、四倍体,近四倍体等多倍体异常核型,共81例。出现异常频率最高的三种核型依次为16-三体(98例);三倍体(55例);X染色体单体(53例)。除染色体数目异常以外还检出32例染色体结构异常,其中罗氏易位12例,平衡易位及易位形成衍生染色体的15例、染色体多态性5例。2.除细胞遗传学分析以外,我们还开展了分子细胞遗传分析,对59例流产组织进行荧光原位杂交,其中正常35例、异常24例(包括染色体的三体12例、X染色体单体6例、假二倍体1例、三倍体5例)。3.按孕妇发生流产时年龄进行分组统计,发现年龄≤35岁的共计794例,其中检出异常核型365例,异常率为45.97%;而年龄>35岁的共200例,其中检出异常核型123例,异常率61.50%。统计学分析结果显示不同年龄分组中异常核型出现概率有显著差异。4.对核型分析结果进行统计,将受孕方式记录准确的745例分为两组,辅助生殖组及自然妊娠组。辅助生殖组共204例,检出异常核型92例,异常率为45.10%;自然妊娠组共541例,检出异常核型260例,异常率48.06%。统计学分析结果显示两种生殖方式异常核型出现的概率无明显统计学意义。5.按性别分组统计流产胚胎发现男性胚胎394例,检出异常核型214例,异常率为54.31%;女性胚胎595例,检出异常核型269例,异常率为45.21%。统计学分析结果显示不同性别胚胎中异常核型出现概率有显著差异。6.对比细胞遗传学和分析遗传学分析技术异常核型检出率之间的差异,发现进行994例细胞遗传学检测共检出异常核型488例,异常率为49.09%;而用分子细胞遗传学方法检测59例,检出异常核型24例,异常率为40.67%。统计学分析结果显示两种不同技术在异常核型检出率上无显著差异。7.本研究还进行了影响绒毛细胞染色体分散的因素的相关研究,发现通过改变温度、湿度、固定液配比比例等方法,可优化绒毛细胞染色体分散状况,提高检测成功率与准确性。同时还对荧光原位杂交的杂交体系、共变性方法及洗脱条件等进行优化,在降低了试剂消耗量的同时提高了实验成功率。结论胚胎染色体异常是造成流产的重要因素,流产组织染色体核型分析以及荧光原位杂交技术是重要的遗传学分析方法。通过对近千例流产病例进行病因学分析发现染色体的非整倍体、多倍体以及结构异常是流产组织中最主要的导致自然流产的染色体异常,其中16-三体、三倍体以及X染色体单体最常见。并且我们还发现辅助生殖和自然妊娠的流产胚胎中染色体异常发生的概率无显著差异,这表明辅助生殖不会显著提升由染色体异常出现概率。而母体年龄的差异则与染色异常的出现密切相关,母体年龄>35岁是导致胚胎染色体异常的高风险因素。除上述发现以外,我们还注意到流产胚胎的性别与染色体异常率有明显的统计学差异,所有流产胚胎中,女性胚胎数量多于男性胚胎,但男性胚胎的异常率高于女性胚胎。染色体G带与荧光原位杂交技术的检测效能基本相同,综上所述联合细胞遗传学技术及分子细胞遗传学技术对流产物的遗传学分析可帮助患者找到流产病因,对指导流产患者再次妊娠有重要意义。