论文部分内容阅读
背景和目的胃内容物误吸是临床麻醉及其他危重症治疗过程中的严重的并发症，因目前尚无有效的治疗手段，因此对返流、误吸的防治一直是临床麻醉学领域一项重要的研究课题。目前对于吸入胃液的主要成分—盐酸复制的动物模型的研究认为，盐酸吸入后引起的继发渗出性炎症反应，其病理改变类似于急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distresssyndrome，ARDS)，而ARDS的发生是由于细胞因子网络的失衡，致炎因子表达过度，使多形核白细胞(Polymorphonuclearneutrophils，PMN)大量激活并在炎症部位聚集，释放活性氧代谢产物(Reactive oxygen species，ROS)及蛋白水解酶，造成肺组织损伤。随着临床评价和实验研究的进展，临床医师逐步认识到糖皮质激素对急性肺损伤的治疗作用，但对该药应用的时机、剂量、疗程国内外存在争议，目前认为早期、中小剂量、延长时间、逐渐减量的治疗方案可取。本实验通过气管内滴注盐酸(1.2ml/kg，PH=1.25)的方法复制大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型；探讨小剂量(2mg/kg)地塞米松(Dexamethasone，Dex)对盐酸吸入所致大鼠ALI的防治作用及其可能机制，为临床治疗ALI提供理论基础和合理用药方向。材料与方法模型建立和分组：应用盐酸气管内滴注复制大鼠ALI模型。将72只SD纯种成年雄性大白鼠随机分成4组(每组18只)：正常对照组(A组)、损伤组(B组)、治疗一组(C组)，治疗二组(D组)，A组气管内滴注生理盐水(1.2ml/kg)后即刻腹腔内注射生理盐水0.5ml，B组气管内滴注HCL(1.2ml/kg，PH=1.25)后即刻腹腔内注射生理盐水0.5ml，C组气管内滴注HCL(1.2ml/kg,PH=1.25)后即刻以Dex(2mg/kg)腹腔内注射(溶于0.5ml生理盐水)，D组气管内滴注HCL(1.2ml/kg，PH=1.25)30min后Dex(2mg/kg)腹腔内注射(溶于0.5ml生理盐水)。以上各组每组18只大鼠，气管内滴入盐酸或生理盐水时间点为零时间点，实验第1、2、6h各处死6只大鼠。各组大鼠按预设时间处死并收集标本用于观察和测定。股动脉取血4℃低温离心(3000r/min)10min，留取上清液，-70℃超低温冰箱保存，待测定血清肿瘤坏死因子-α水平，放血处死动物，快速开胸取肺。用4％甲醛固定右下肺叶，在光镜下观察肺组织的病理改变；右上肺取材4％甲醛固定保存，透射电镜下观察肺毛细血管基底膜和Ⅱ型肺泡上皮细胞的病理变化；右中肺称湿重后置于80℃烤箱，48h后，称干重并计算W/D；随后用4℃生理盐水3ml分两次进行左肺灌洗，取摇匀的灌洗液原液1滴，于400倍高倍镜下做细胞总数计数(除上皮细胞及红细胞)，灌洗液4℃低温离心(3000r/min)10min，留取上清液，-70℃超低温冰箱保存，待以后批量测定蛋白含量及肿瘤坏死因子-α、IL-8、IL-10水平。采用SPSS10.0统计软件包行单因素方差分析或采用重复测量数据的方差分析，方差不齐则行变量变换后再做统计分析，取α=0.05作为检验水准。所有数据均以均数±标准差((?)±s)表示。结果(1)普通光学显微镜观察石蜡切片HE染色可见A组无明显损伤或损伤轻微，肺泡结构完整，肺泡壁无水肿，有少量白细胞浸润。B组损伤最明显，可见肺泡壁破坏严重，弥漫性充血水肿，肺间质、肺泡水肿，肺泡间隔增宽，大部分肺泡萎陷、肺实变，肺内大量多形核白细胞(PMN)浸润。C组肺组织损伤程度较B组减轻，见肺间质有轻度或中度水肿，白细胞浸润程度较轻。D组肺组织损伤程度介于B、C组之间(2)透射电子显微镜观察A组肺毛细血管基底膜完整，毛细血管内皮细胞正常，肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或椭圆形，胞浆丰富，游离面微绒毛完整，板层体结构完整，呈圆形，有包膜，内见电子密度较高并呈同心圆排列的层状结构；B组可见毛细血管内皮细胞肿胀，内皮细胞间隙增宽，肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛破坏程度严重，微绒毛变短、减少甚至消失，Ⅱ型上皮细胞板层体排空；C、D组游离面微绒毛轻度破坏。(3)肺湿/干重比(W/D)B、C、D三组的肺湿/干重比较A组升高(p＜0.05)，C组较B、D组降低(p＜0.05)，B、D组肺湿/干重比无统计学差异(p＞0.05)。(4)BALF细胞总数与蛋白水平在各个时间点，四组BALF细胞总数均有统计学差异(p＜0.05)，从高到低依次是损伤组、治疗二组、治疗一组、对照组。与对照组比较，其余三组BALF中蛋白水平在各时间点均增高(p＜0.05)；与损伤组比较，治疗一组BALF中蛋白水平在各时间点均下降(p＜0.05)，治疗二组在各时间点无统计学差异(p＞0.05)。(5)血清及BALF中TNF-α浓度与对照组比较，其余三组血清及BALF中TNF-α浓度在各时间点均增高(p＜0.05)；与损伤组比较，治疗一组血清及BALF中TNF-α浓度在各时间点均下降(p＜0.05)，治疗二组血清TNF-α浓度无统计学差异(p＞0.05)，BALF中TNF-α浓度下降(p＜0.05)。(6)BALF中IL-8和IL-10浓度与对照组比较，其余三组BALF中IL-8浓度在各时间点均增高(p＜0.05)，与损伤组比较，治疗一组BALF中IL-8浓度在各时间点均下降(p＜0.05)，治疗二组BALF中IL-8浓度无统计学差异(p＞0.05)。与对照组比较，其余三组BALF中IL-10浓度在各时间点均增高(p＜0.05)，与损伤组比较，治疗一组和治疗二组BALF中IL-10浓度在各时间点均升高(p＜0.05)，与治疗一组比较，治疗二组BALF中IL-10浓度降低(p＜0.05)。结论(1)大鼠气管内滴注HCL可引起大鼠ALI，可用于复制大鼠ALI模型。(2)中小剂量地塞米松可能通过干预TNF-α、IL-8及IL-10等炎症因子/抗炎因子的产生而发挥肺保护的作用。(3)地塞米松干预时间与炎症的发生、发展存在一定的时效关系，早用药效果更好。