【摘 要】
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目的:为在体外考察微管结合蛋白STOP对孤独症谱系障碍BTBR小鼠少突胶质细胞髓鞘形成的影响,本项目初步研究背根神经节神经元-少突胶质前体细胞共培养体系的建立。项目首先建立一种较高纯化率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的原代培养方法;利用慢病毒载体转染的方法,构建BTBR小鼠少突胶质前体细胞过表达STOP基因的体外细胞模型;其次建立SD大鼠背根神经节神经元的原代培养方法,为研究微管结合蛋白S
【基金项目】
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国家自然科学基金“微管结合蛋白 STOP 参与孤独症发病的机制研究（编号:81671364）”；
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目的:为在体外考察微管结合蛋白STOP对孤独症谱系障碍BTBR小鼠少突胶质细胞髓鞘形成的影响,本项目初步研究背根神经节神经元-少突胶质前体细胞共培养体系的建立。项目首先建立一种较高纯化率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的原代培养方法;利用慢病毒载体转染的方法,构建BTBR小鼠少突胶质前体细胞过表达STOP基因的体外细胞模型;其次建立SD大鼠背根神经节神经元的原代培养方法,为研究微管结合蛋白STOP对BTBR小鼠少突胶质细胞髓鞘形成的作用提供实验研究基础。方法:1、利用BTBR乳鼠作为实验对象,将大脑皮质用胰酶消化制备成单细胞悬液。采用免疫磁珠细胞分选法进行细胞分选,培养5天后用少突胶质前体细胞标志物染色进行细胞纯度鉴定。2、取原代培养的少突胶质前体细胞,利用项目组前期构建的STOP基因载体,进行转染实验。转染72-96小时后在荧光显微镜下观察细胞携带荧光的显色,进行转染效率的鉴定。3、利用SD大鼠乳鼠为实验对象,解剖摘取背根神经节制备成单细胞悬液,采用抗有丝分裂培养法培养原代背根神经节神经元。结果:1、利用免疫磁珠分选法提取的BTBR小鼠少突胶前体细胞在48小时后基本完全贴壁,细胞生长状态良好,增殖能力较强。培养第5天,用免疫荧光法鉴定显示细胞纯度达95%以上。2、建立了一种转染效率较高的BTBR小鼠原代少突胶质前体细胞的慢病毒转染方法,用Hoechst染料活细胞染色后显示细胞转染率较高且细胞存活率较高。3、利用抗有丝分裂培养法成功培养出纯度较高的SD大鼠原代背根神经节神经元。结论:1、采用免疫磁珠细胞分选法成功分选培养获得纯度较高的BTBR小鼠大脑皮质原代少突胶质前体细胞,采用抗有丝分裂培养法成功培养出纯度较高的SD大鼠背根神经节原代神经元。2、成功建立了一种转染率较高的慢病毒感染BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的方法,构建了BTBR小鼠少突胶质前体细胞过表达STOP基因的体外细胞模型。
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