【摘 要】
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目的:证明NGF转染骨髓间充质干细胞后高表达,转染后细胞增殖活性不受影响,在含富血小板血浆的成骨诱导剂诱导下可促进成骨分化。方法:将培养获得的BMSCs分成3三组,A组:NGF过表达转染组、B组:阴性病毒转染组（绿色荧光空病毒）、C组:未转染组。利用转基因技术构建的NGF过表达重组慢病毒对BMSCs进行转染,连续培养7天后荧光显微镜观察其转染效率,再以Western-Blot方法检测三组细胞NGF
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目的:证明NGF转染骨髓间充质干细胞后高表达,转染后细胞增殖活性不受影响,在含富血小板血浆的成骨诱导剂诱导下可促进成骨分化。方法:将培养获得的BMSCs分成3三组,A组:NGF过表达转染组、B组:阴性病毒转染组（绿色荧光空病毒）、C组:未转染组。利用转基因技术构建的NGF过表达重组慢病毒对BMSCs进行转染,连续培养7天后荧光显微镜观察其转染效率,再以Western-Blot方法检测三组细胞NGF蛋白表达情况,CCK-8法分别检测三组细胞增殖活性。用含有10%激活PRP的成骨诱导剂诱导三组细胞成骨分化,同时用不含PRP的成骨诱导剂诱导正常BMSCs作为空白对照组（D组）,第5,9,14天分别用碱性磷酸酶检测试剂盒检测成骨分化程度,同时用茜素红染色法来检测钙结节生成情况。结果:以NGF重组慢病毒转染鼠BMSCs后常规DMEM低糖完全培养基培养,CCK-8法测定三组细胞增殖活性无明显区别（差异比较无统计学意义,P＞0.05）。连续培养14 d,三组细胞形态均无明显变化。倒置荧光显微镜下观察转染后第3天开始出现绿色荧光,7 d时荧光表达明显增多,转染效率为90%以上。Western blot方法检测,培养7d后A组的NGF蛋白表达水平较B、C组明显增高。经诱导成骨分化后,与B、C、D三组相比较,各时间点A组（NGF转染联合PRP诱导组）细胞的碱性磷酸酶活力均显著增高（差异有统计学意义,P＜0.05）,A、B、C三组细胞的碱性磷酸酶活力均高于D组（差异有统计学意义,P＜0.05）。诱导14天后茜素红染色可见D组仅有部分钙结节形成,而使用含10%激活PRP成骨诱导剂诱导的A、B、C三组的细胞均可见类骨组织生成。结论:转基因技术重组NGF慢病毒可成功转染大鼠BMSCs获得高表达,转染对细胞增殖无明显影响。含10%激活PRP的成骨诱导剂、过表达的NGF均对BMSCs的成骨分化活性有促进作用,而且过表达NGF联合PRP对BMSCs成骨分化的促进作用更强。
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