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子宫颈癌有着较高的发病率,其治疗主要还是以手术和放疗为主,可使部分患者得到根治或缓解,但有部分患者单纯放疗仍然预后不佳。尤其是宫颈腺癌,不如宫颈鳞癌对放射线敏感,临床期别较晚、淋巴结有转移的患者,初始治疗后很快又复发、转移。且其发病还有逐渐增加趋势。因此为改善预后,临床迫切需要探讨对宫颈腺癌更为有效的疗法。胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD)是卡培他滨(capecitabine,CAP)两种主要代谢酶,肿瘤组织内的这两种酶是决定其化疗有效性的关键因素,有研究结果显示,X线照射能增加某些人癌异种移植肿瘤组织类型中TP水平,提高了卡培他滨在肿瘤内转化为5-FU的浓度,与放疗联合应用能明显提高抗肿瘤疗效,但放射线对宫颈腺癌TP酶及DPD酶的影响目前尚无研究报道。本文通过宫颈腺癌HeLa细胞体外培养采用,采用ELISA及RT-PCR的方法对照射前后不同时间TP、DPD酶及其mRNA的表达进行测定,探讨了X线照射对宫颈腺癌细胞HeLa细胞TP、DPD酶的影响,为卡培他滨与放射联合用于宫颈腺癌的治疗提供了依据。材料与方法一、实验材料1、细胞株:宫颈腺癌HeLa细胞株由中国医科大学盛京医院感染科实验室提供。2、试剂:ELISA法测定TP酶的试剂盒购自德国罗氏公司;cDNA第一链合成逆转录试剂盒、PCR试剂盒、Taq DNA、聚合酶DNA Marker均购自大连宝生物工程有限公司;TP、DPD引物由上海Invitrogen英俊生物技术有限公司合成;二、实验方法宫颈腺癌HeLa细胞用含10%胎牛血清的1640培养基,于37℃、5%CO2饱和湿度条件的培养箱中培养传代培养,按X线照射的不同剂量分成对照组(0Gy)、2Gy、4Gy、6Gy放射组。分别于照射前1天(第0天),照射后第1天,第3天,第5天,第7天,第9天收集细胞,ELISA测定HeLa细胞照射前后TP酶蛋白含量按试剂盒说明进行。RT-PCR检测HeLa细胞放射前后TP,DPD酶mRNA表达。实验数据采用SPSS12.0软件进行统计学处理,对照组与放射组之间差异采用t检验。P<0.05为差异显著,有统计学意义,P<0.01差异非常显著。实验结果HeLa细胞被放射后,与对照组相比,2Gy、4Gy、6Gy三个放射组的TP酶蛋白水平均有明显提高(P<0.05),放射后第3天都升高达高峰,差别有显著意义(P<0.01)。放射后HeLa细胞TP酶的mRNA表达,在照射后第3天迅速升高达到高峰,明显高于未经照射的对照组,统计学检验P<0.05。其升高时间与ELISA测定的TP酶蛋白水平的变化情况基本相吻合。而HeLa细胞DPD酶mRNA的表达,在放射组与对照组之间未见明显差异(P>0.05)。结论1、子宫颈腺癌HeLa细胞经放射线照射后TP酶蛋白水平和TP酶mRNA表达均得到了提高,而DPD酶mRNA表达不受影响,因此放射后HeLa细胞TP/DPD比值升高,能增加其对卡培他滨的敏感性。2、卡培他滨与放疗联合应用于宫颈腺癌的治疗可能会得到较好疗效。