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A群猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)是导致仔猪腹泻的主要病原之一,属于轮状病毒(Rotavirus,RV)的一种。其非结构蛋白5(NSP5)是病毒质(病毒复制的工厂)的主要组分之一,研究显示NSP5对RV复制具有重要意义,但其在RV复制中如何发挥作用尚不明确。本研究发现NSP5与β-tubulin存在相互作,且在许多病毒上的研究发现,β-tubulin能够通过与病毒蛋白相互作用,从而对病毒复制起着复杂的影响。因此有必要探究β-tubulin对RV复制的影响。本研究以NSP5为研究对象,通过GST pull-down技术结合蛋白质谱鉴定技术,发现A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5与宿主细胞(MA 104细胞)β-tubulin间存在相互作用;并通过Co-IP技术证明,不仅外源表达的NSP5与β-tubulin存在相互作用,且A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株感染时NSP5与β-tubulin也存在相互作用;本研究进一步利用激光共聚焦扫描显微镜技术证明了A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5与β-tubulin共定位于细胞质中。至此本研究证明了A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5与β-tubulin存在相互作用。本研究进一步探究了A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株感染对宿主细胞β-tubulin的影响。首先通过激光共聚焦扫描显微镜技术证明,A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株感染过程中,MA 104细胞β-tubulin从微管上解聚,导致微管网络解聚,出现与NSP共定位的颗粒状β-tubulin;而在仅使用诺考达唑(抑制β-tubulin向微管聚合的抑制剂)处理的细胞中,虽然β-tubulin能够从微管上解聚,但胞质中却观察不到颗粒状β-tubulin。结果说明A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株的感染能够诱导β-tubulin从微管上解聚,且病毒的某些成分诱导颗粒状β-tubulin形成。此外,本研究进一步探究了宿主细胞β-tubulin对A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株复制的影响。通过瞬时转染证明,过表达β-tubulin抑制A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5和VP6蛋白的合成与表达,且抑制病毒的复制;通过si RNA干扰技术证明,下调β-tubulin促进A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5和VP6蛋白的合成与表达,且促进病毒的复制;通过诺考达唑和ABT-751(抑制β-tubulin向微管聚合的抑制剂)实验证明,抑制β-tubulin向微管聚合,促进A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5和VP6蛋白的合成与表达,且促进病毒的复制;通过紫杉醇(抑制β-tubulin从微管上解聚的抑制剂)实验证明,抑制β-tubulin从微管上解聚,抑制A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株NSP5和VP6蛋白的合成与表达,且抑制病毒的复制。因此,本研究认为β-tubulin对A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株的复制呈现负调控作用。本研究首次证明了PoRV NSP5与β-tubulin存在相互作用,且参与A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株的复制,对A群PoRV G9P[23]型NMTL毒株复制呈负调控作用,提示NSP5可能通过与β-tubulin相互作用,进而影响RV复制。这一研究结果将深入我们理解NSP5对RV复制的意义,也为研制RV疫苗和药物提供新的分子靶标。