海南香蕉枯萎病绝大多数是由尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种(Fusarium.oxysporf. sp. Cubense race 4)侵染而引起,几乎能够侵染所有的香蕉品种,利用化学方法极难防治。因此研究生防菌及其抑菌机制,采用高效率、对环境友好的生物防治方法防治该病害引起了广泛关注。B43菌株为本实验室前期分离纯化获得的对橡胶白粉病菌有着较好拮抗效果的枯草芽孢杆菌,对香蕉枯萎病菌及多种热带植物病原真菌均有着强烈抑制作用。本研究以香蕉枯萎病菌作为抑菌对象对B43菌株的抗菌活性物质进行了研究,为有效防治香蕉枯萎病,探索B43菌株的生防前景,以及今后对B43菌株的开发与应用推广提供理论依据。1、平板对峙法对B43菌株进行抑菌试验表明:该菌株具有广谱的抑菌特性。对21种供试病原真菌有很强的拮抗作用,经过数据分析,抑菌率为38.03%～85.51%,其中对靶标菌香蕉枯萎病菌的抑菌率达到56.54%,对导致芒果新型病害粉红聚端孢叶斑病的Trichothecium roseum抑制效果最强,抑制率高达85.51%。2、对B43菌株抗香蕉枯萎病菌活性物质定位试验表明:该菌株所产生的主要抗菌物质存在于发酵上清液中,该种抗菌活性物质为胞外分泌型的代谢产物。3、对B43菌株活性物质的发酵条件探索试验表明:该菌株在LB培养基中发酵能够产生最多的抗菌活性物质;培养基pH 6,装液量40%时,以5%接种量接种B43菌株,摇床培养3d (28℃,200r/min),菌体生长繁殖可达到高峰。4、酸沉淀法、有机溶剂萃取法提取B43菌株中的抑菌活性物质试验结果表明:酸沉淀法以及乙酸乙酯萃取法均能够提取出上清中的抑菌活性物质,其中酸沉淀粗提物的抑菌半径为上清的98.65%,乙酸乙酯萃取法提取出的仅为上清的55.63%。酸沉淀粗提物稳定性测定结果表明:经100℃处理后抑菌活性为对照的72%,表明B43菌株的活性物质在一定程度上具有热稳定性;而在pH为2～4, 8～11时,抑菌活性均有所减弱,表明B43菌株的活性物质不耐强酸强碱,其适宜的pH为5.0～7.0;经紫外线照射150min后,抑菌活性仍为对照的71.46%,表明B43菌株对紫外线具有一定的耐受性。5、高效液相色谱法对酸沉淀法粗提物中的脂肽类物质进行了分析,结果表明:粗提物中可能含有 Surfactin、Iturin、Mycosubtilin、Bacillomycin 和 Fengycin5 类脂肽类抗生素的同系物24种;通过特异性引物PCR检测,B43菌株基因组中含有srfAB、ituA、ituB、ituD、fenD、yndJ、sfp、mycB、lpa-14 或 fenB 等脂肽类合成相关基因。6、通过追踪抗菌活性的方法,对酸沉淀粗提物以及乙酸乙酯萃取物中活性物质进行分离,最终于乙酸乙酯萃取物中获得了 3个有活性的单体化合物,使用质谱法以及核磁共振等对3种化合物进行分析鉴定,分别为2,6-二甲氧基对苯醌、1-十二醇、二苯并呋喃,均为挥发性活性物质。以其对靶标菌FOC-4抑菌活性大小的排序为:2,6-二甲氧基对苯醌> 二苯并呋喃> 1-十二醇。其中未见报道从枯草芽孢杆菌中分离获得2,6-二甲氧基对苯醌。