真核生物多顺反子mRNA翻译起始研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liu554802016
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真核生物与原核生物一个很重要的区别就在于真核生物mRNA是单顺反子结构,而原核生物mRNA是多顺反子结构。自从Kozak等提出了扫描机制模型后,这种起始方式就成为了真核生物mRNA翻译过程中最重要的机制之一。是否存在其他翻译的起始方式,真核生物中是否存在多顺反子mRNA,这些问题对于更清楚的了解真核生物的翻译过程以及目前对于真核生物中基因的认识和研究都有着十分重要的作用。为了对真核生物mRNA的翻译起始方式进行更全面的探讨,我们以GFP基因的开放阅读框为基础,利用PCR的方法对其进行改造,得到一系列处于不同阅读顺序和相同阅读顺序下的多顺反子结构,进而构建得到了一系列重组表达载体。将这些重组表达载体转染人肝癌Bel-7402细胞后,通过荧光显微镜观察、Western Bolt、流式细胞仪检测等多种方式,证明了在不同阅读顺序下,间隔很近的两个起始密码子都可以起始相应阅读框的翻译,而在同一阅读顺序下,多个间隔较远的起始密码子中只有第一个密码子能够起始相应阅读框的翻译。从而表明真核细胞中多顺反子mRNA在一定条件下可以同时翻译,其翻译的起始方式可能有别于经典的扫描机制模型。并提出了在真核生物mRNA翻译过程中,一部分起始前复合物能够通过第一个起始密码子,继续向3’端扫描并识别下游的AUG密码子,但AUG密码子对起始前复合物具有一定的促降解作用,起始前复合物在越过AUG密码子后的扫描是一个逐步降解过程的假设,为今后更全面的研究真核生物翻译起始机制提供了参考。
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