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目的 1.制备雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2聚合物材料,从起始原料、反应温度、反应时间、后处理方式等影响材料合成的关键因素角度,优化最佳合成工艺;2.制备雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2聚合物胶束,从药载比、载体浓度、滴水体积、透析时间等影响胶束组装的关键因素角度,优化出最佳的雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2聚合物（载药/空白）胶束（CG-M）制备工艺。考察不同体外条件下的胶束稳定性、药物释放行为以及包封率/载药量等重要的制剂学参数;3.验证雷公藤红素和人参皂苷Rh2协同抗肿瘤的最佳质量配比,从细胞学水平探讨CG-M体外抗NSCLC优势;4.考察CG-M的药动学、生物分布以及体内抗肿瘤效应,从体内水平评价CG-M的抗肿瘤优势及潜在机制;5.评价CG-M在体内外水平逆转多药耐药型NSCLC的可行性和有效性,从不同水平考察逆转肿瘤耐药的潜在机制。方法 选用不同的PEG起始原料,将雷公藤红素和人参皂苷Rh2分别通过酰胺和酯键与其偶联,借助单因素法考察反应温度、反应时间、柱层析纯化方法对反应产率的影响。采用1H NMR和FT-IR等方法确证偶联后的特征键化学信号。通过芘包埋法测定雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2的临界胶束浓度值（CMC）。以雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2为载体材料,以雷公藤红素为包埋药物,通过单因素法考察CG-M的制备工艺。通过不同pH、稀释倍数、血清等环境考察CG-M的稳定性,通过体外水解释药法考察CG-M在血清下的解组装和药物释放行为。通过不同质量配比的雷公藤红素和人参皂苷Rh2以及不同胶束组的设置,评价各治疗组对A549非小细胞肺癌细胞增殖抑制的有效性;通过胞内药物定量法考察各治疗组的A549细胞摄取能力。借助Annexin V/7-AAD凋亡试剂盒考察各治疗组对A549细胞凋亡诱导能力。以C6为荧光探针制备可视化CG-M胶束（C6/CG-M）,对溶酶体进行Lyso-Tracker Red染色,通过激光共聚焦显微镜观察C6/CG-M进入细胞后的胞内分布情况。设置CG-M、空白CG-M和雷公藤红素+人参皂苷Rh2等不同治疗组,考察单次尾静脉注射对SD大鼠血浆样本的药时曲线和药动学参数;设置CG-M、CG-Mblank和雷公藤红素+人参皂苷Rh2等不同治疗组,对单次尾静脉注射A549异位移植瘤裸鼠12h后肿瘤及正常组织内的药物含量进行定量;相同治疗组对A549异位移植瘤裸鼠进行8次间隔尾静脉注射治疗,以肿瘤生长、抑瘤率、生存曲线、体重等指标考察CG-M在体内抗肿瘤治疗的优越性。设置雷公藤红素、雷公藤红素+人参皂苷Rh2（不同质量比）、CG-M、CG-Mblank等治疗组,MTT法考察各制剂对A549/MDR细胞的增殖抑制;胞内药物标定以及荧光标记法定量定性考察各制剂被耐药细胞摄取的能力;借助Annexin V/7-AAD凋亡试剂盒考察各组对A549/MDR细胞凋亡诱导的能力。相同治疗组考察对A549/MDR荷瘤裸鼠肿瘤生长能力、动物生存曲线、体重变化以及生化指标的影响。结果 雷公藤红素-聚乙二醇-人参皂苷Rh2最优的合成方法如下:无水pNP-PEG5000-pNP为原料,氯仿为溶剂,回流反应24h,DCM/MeOH（4/1,V/V）柱层析洗出副产物后甲醇加压冲出产物,真空干燥后得纯品。1H NMR和FT-IR确证产物为设计的结构。PEG两端偶联上等摩尔量的雷公藤红素和人参皂苷Rh2后,CMC值约为64.6 μg/mL（1 × 10-5 M）。CG-Mblank的最优制备工艺参数为:载体浓度为50 mg/mL;滴水体积为5 mL;透析时间为24 h。空白CG-M体外释放行为不受pH环境影响,在弱酸和血清条件下24h累计释放出约50%雷公藤红素和40%的人参皂苷Rh2。CG-Mblank粒径为～100nm,zeta电位约为-23 mV,对pH和液体稀释具有一定的稳定性,且能够对血清发生敏感性解组装和释药。最优的CG-M的制备工艺参数为:药载比为2/10（w/w）;载体浓度为50mg/mL;滴水体积为5mL;透析时间为12h。载药CG-M粒径为～120nm,zeta电位为～-22mV,胶束对弱酸和稀释具有一定的耐受性,对血清会发生敏感解组装和释药。雷公藤红素和人参皂苷Rh2质量配比为5/2（w/w）时具有明显的协同抗肿瘤效应。以此质量配比制备的CG-M能够显著抑制A549细胞的增殖、提高细胞摄取和凋亡。CG-M进入A549细胞后主要在溶酶体内分布,该生理环境适合CG-M的解组装和活性成分的水解、释放。CG-M相比其它对照组,在血液滞留时间、曲线下面积、血浆峰浓度以及肿瘤分布等药学参数方面表现出了显著的优势。CG-M治疗在肿瘤抑制和生存期方面明显优于其他对照组,且体重、血清生化、肝脾指数等安全性方面表现较好。CG-M和CG-Mblank均能有效抑制A549/MDR细胞的生长,提高耐药细胞内的药物含量,促进耐药细胞的凋亡,其机制可能与人参皂苷Rh2干扰了 P-gp ATP酶活性以及胶束系统促进了活性组分细胞内化有关。CG-M和CG-Mblank均能显著阻滞了 A549/MDR移植瘤的生长,延长了 A549/MDR荷瘤裸鼠的生存时间,其机制可能与胶束抑制了瘤内细胞增殖、促进了细胞凋亡有关。CG-M和CG-Mblank治疗后体重未出现大幅降低,生化指标未出现明显异常,体内治疗的安全性较好。结论 CG-M可以搭载最优质量比的雷公藤红素和人参皂苷Rh2,在体内外协同抗NSCLC以及耐药型NSCLC模型方面优势显著,有一定的转化应用前景。