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[目的]首先通过扫描电镜、电导率的测定等实验研究探索滇重楼乙醇提取物抑制痤疮丙酸杆菌可能的机制;再通过原材料的筛选初步制备含滇重楼提取物的温度敏感型水凝胶,进而对处方进行优化,制作出最佳配比凝胶后对其进行初步质量评价;在此基础上通过痤疮动物模型验证本凝胶的疗效,为滇重楼乙醇提取物水凝胶的临床应用奠定实验基础。[方法]1.滇重楼提取物抑制痤疮丙酸杆菌机制的初步研究（1）通过时间梯度共培养法后扫描电镜拍摄观察滇重楼乙醇提取物对痤疮丙酸杆菌形态结构的影响;（2）通过电导率法测试滇重楼乙醇提取物对痤疮丙酸杆菌的细胞壁、细胞膜结构的影响;（3）通过时间梯度共培养法测试滇重楼乙醇提取物对痤疮丙酸杆菌吸附率的影响来评价其对细菌致病力的影响。2.滇重楼提取物外用水凝胶的制备（1）采取冷法工艺将泊洛沙姆407与泊洛沙姆188制备成不同比例的水凝胶,并在其交联过程中采用物理混合法混合载入滇重楼提取物溶液,制备出负载滇重楼提取物/泊洛沙姆的外用型水凝胶;（2）在滇重楼提取物外用水凝胶的制备过程中,采用单因素试验,以相变时间、单一成分为评价指标来考察不同因素对水凝胶制备的影响,并利用各因素与相变时间之间的相关性选出影响水凝胶制备的显著因素,再运用正交实验进一步优化处方,在此基础上确定滇重楼提取物外用水凝胶的最优处方工艺。3.滇重楼提取物外用水凝胶的初步质量研究与安全性评价（1）用FT-IR、SEM对水凝胶的包载合成、形貌结果进行表征;（2）从凝胶的外观、pH值、黏度、胶凝温度、胶凝时间和稳定性试验等方面对所制备的凝胶制剂进行质量评价;采用HPLC检验滇重楼提取物外用水凝胶的体外药物释放情况;运用共培养法检测滇重楼提取物外用水凝胶的抗菌性能;（3）采用MTT法和calcein AM/PI双染法观察角质形成细胞的增殖与存活来测定滇重楼提取物外用水凝胶的生物相容性;利用急性皮肤刺激实验与过敏性实验评价滇重楼提取物外用水凝胶的安全性。4.滇重楼提取物外用水凝胶对小鼠痤疮模型的疗效评估（1）建立ICR小鼠耳廓痤疮模型,通过表观指标判断造模是否成功;（2）对小鼠痤疮模型不同分组进行HE染色,同时采用IHC、ELISA对不同分组小鼠痤疮模型组织中的TNF-α、IL-1β和IL-6作为检测指标,来探讨滇重楼提取物外用水凝胶对ICR小鼠耳廓痤疮模型的疗效。[结 果]1.滇重楼乙醇提取物对痤疮丙酸杆菌有明确抑制作用,且通过实验验证其作用机制。2.制备的含滇重楼提取物水凝胶最佳配比的组合为24%P407+1%P188+0.5%药物,该凝胶的最适胶凝温度应不大于33℃,且越接近32℃越适宜。3.（1）FT-IR可以得出滇重楼乙醇提取物在3252.79cm-1和287.57cm-1处有O-H不对称伸缩振动模式和C-H不对称伸缩振动模式,载药凝胶在3401.84cm-1和2882.90cm-1有相同不对称伸缩振动模式,说明含滇重楼提取物水凝胶的合成成功;SEM结果表明含滇重楼提取物水凝胶内部疏松多孔,呈现出不规则的微腔,微腔壁同样出现多孔结构,总体呈现出三维网状结构;（2）滇重楼提取物外用水凝胶的初步质量研究发现所制备水凝胶外观为透明无色、均匀性良好、细腻、粘度适中;pH值为7.19±0.01。考察载药凝胶经离心试验后结果显示凝胶仍保持均匀澄清,均未出现分层现象;在4℃条件下性状稳定,凝胶的外观性状、pH值粘度以及凝胶温度也无明显变化,可长期储存;滇重楼提取物水凝胶体外释放实验表明:体外释放性能较好,表现出缓释的效果;利用共培养法测试滇重楼提取物水凝胶对痤疮丙酸杆菌的抑菌作用,48h后对琼脂板观察可见,空白水凝胶在抑制细菌生长方面无明显效果,细菌生长与单纯细菌的琼脂板上细菌生长情况无明显差别,但可以看出含滇重楼提取物水凝胶的琼脂板上细菌生长有减少,这说明了包载滇重楼提取物的水凝胶有抑制细菌生长的作用;（3）细胞相容性实验:MTT实验结果提示:不同药液含量的水凝胶对HaCaT细胞的增殖并无明显影响,其中,0.5%载药凝胶相对于其他组而言,毒性更小,并且可以促进细胞增殖,且细胞形态良好;calcein AM/PI双染法表明载药水凝胶对HaCaT细胞的形态和增殖无明显影响,说明含滇重楼提取物凝胶无细胞毒性且具有良好的生物相容性;测定滇重楼提取物水凝胶对小鼠背部皮肤的急性刺激性与过敏反应,实验过程中小鼠背部脱毛处皮肤可见正常新生毛发,皮肤颜色正常,未见明显红斑、水肿,说明滇重楼提取物水凝胶用于临床治疗痤疮,具有良好的安全性。4.小鼠造模部位拍照、测量耳廓厚度、HE染色均可证明实验造模成功,且药物治疗有效;IHC、ELISA提示低、中、高浓度组小鼠TNF-α、IL-1β、和IL-6蛋白的含量逐渐下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）。[结 论]1.滇重楼乙醇提取物具有抑制痤疮丙酸杆菌的作用,可能机制为:破坏细菌细胞壁结构、增加细菌细胞膜通透性与增加细菌细胞膜的表面疏水性从而降低其粘附性有关。2.滇重楼乙醇提取物适合制备成水凝胶制剂,所制备出的剂型药剂学性能良好,具有抗痤疮丙酸杆菌的作用,且具有一定的缓释效应,同时不同浓度的滇重楼提取物水凝胶均有一定的抗痤疮炎症的效应,这为滇重楼乙醇提取物开发外用剂型奠定了实验基础。