【摘 要】
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目的:1.对川椒方进行急性经口毒性评价。2.运用传统急毒方法与新型急毒方法分别对治疗过敏性结膜炎有效的川椒方进行急性经口毒性实验研究,以比较这两种方法的毒性分级结果。方法:实验一:1.实验方法的选择:根据预实验最大耐药量实验结果,决定正式实验为最大给药量实验,24h内经口予小鼠最大浓度川椒方、最大剂量灌胃,随后根据小鼠的14天的生存情况,对川椒方进行急性经口毒性评价,同时计算小鼠对于川椒方的最大给
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目的:1.对川椒方进行急性经口毒性评价。2.运用传统急毒方法与新型急毒方法分别对治疗过敏性结膜炎有效的川椒方进行急性经口毒性实验研究,以比较这两种方法的毒性分级结果。方法:实验一:1.实验方法的选择:根据预实验最大耐药量实验结果,决定正式实验为最大给药量实验,24h内经口予小鼠最大浓度川椒方、最大剂量灌胃,随后根据小鼠的14天的生存情况,对川椒方进行急性经口毒性评价,同时计算小鼠对于川椒方的最大给药倍数量。2.分组及给药:将40只体重为20g左右的昆明小鼠,按照随机数字表法,分为川椒方实验组和空白对照组,每组8只,雌雄各半,分别于给药当天6点、12点、18点,给予最大浓度的川椒方水煎液以及等体积的蒸馏水。3.观察指标:以小鼠有无出现死亡为实验结局,同时并记录小鼠情况,例如:皮毛色泽、大小便情况等;记录给药前与给药后14天小鼠的体重情况。4.最大给药倍数:实验结束后,计算最大给药倍数。5.组织病理学观察:在实验观察14天结束后,每组取4只小鼠进行肝肾、眼球进行病理切片以及HE染色,采用HE染色法观察小鼠肝脏、肾脏、眼球各层组织病理学改变。同时取8张肝肾、眼球切片,于X40倍光学显微镜下拍摄图像。6.急性经口毒性等级判定:根据实验结果,依据急性毒性估计值（Acute Toxicity Estimate,ATE）和急性毒性危险GHS分类标准,对川椒方进行急性经口毒性分级。实验二1.实验方法的选择:采用固定剂量法,预实验需在24h内,经口给予小鼠川椒方,在口服用量5mg/kg,50mg/kg,500mg/kg和2000mg/kg中选择一个作为起始剂量灌胃,根据预实验摸索正式实验剂量,通过小鼠的14天的毒性反应情况,对川椒方进行急性经口毒性评价。2.分组及给药:正式实验用随机数字表法,取5只小鼠,空腹经口灌胃川椒方水煎液成人剂量2000mg/kg,无需对照组。3.观察指标:以小鼠出现毒性反应为结局指标,并记录小鼠情况例如:皮毛色泽、大小便情况等,记录给药前与给药后14天小鼠的体重情况。4.本次研究目的之一为比较新旧两种急毒方法结果,因此在实验二结束后,对小鼠进行了人道主义处死,取小鼠肝肾、眼球组织进行观察。5.病理学观察:实验观察14天结束后,处死小鼠,进行肝肾、眼球进行病理切片以及HE染色,采用HE染色法观察小鼠肝脏、肾脏、眼球各层组织病理学改变。于X40倍光学显微镜下拍摄图像。5.急性经口毒性等级判定:根据实验结果,依据急性毒性估计值（Acute Toxicity Estimate,ATE）和急性毒性危险GHS分类标准,将川椒方进行急性经口毒性分级。结果:实验一:1.小鼠生存情况:实验观察14天结束后,各剂量组小鼠均未出现死亡。实验观察期第1天见实验组小鼠出现稀软便,观察期第2天至观察期第14d结束,实验组小鼠排便未见异常。其余观察指标未见异常。2.体重变化情况:所有小鼠于实验当天、给药后14天称重,结果显示川椒方实验组与空白对照组雌性小鼠、雄性小鼠体重均有增加,属生理范围,两组小鼠组间于给药0天、14天体重变化差异均无统计学意义（P＞0.05）。3.最大给药倍数:川椒方水煎液最大浓度7.37g/ml,最大容积0.4ml/10g灌胃,一天之内3次灌胃,即一天给药量为884.4g（生药）/kg,为临床成人每日推荐用药量（1.37g/kg）的646倍。4.组织病理学:小鼠剖检后未发现脏器的质地、形态、体积及颜色等有异常变化。（1）肝脏组织:川椒方实验组与空白对照组小鼠的肝脏病理切片镜下表现为肝细胞水肿（水样变性）,弥漫性,未见其他病变。（2）肾脏组织:川椒方实验组雌性小鼠肾脏切片镜下可见部分肾小球内蛋白沉积,表现为红色均染的圆形小滴,但雄性动物表现不明显。空白对照组未见异常。（3）眼球组织:川椒方实验组与空白对照组小鼠眼球各结构均未见异常。实验二:1.小鼠生存情况:实验观察14天结束后,实验组小鼠均未出现死亡,观察指标未见异常。2.体重变化情况:所有小鼠于实验当天、给药后14天称重,结果显示每只小鼠体重均有增加,属生理范围。3.组织病理学:小鼠剖检后未发现脏器的质地、形态、体积及颜色等有异常变化。（1）肝脏组织:FDP正式实验组各小鼠的肝脏病理切片镜下表现为肝细胞水肿（水样变性）,弥漫性,未见其他病变。（2）肾脏组织:FDP正式实验组的2只雄性小鼠的肾脏病理切片镜下未见异常,3只雌性小鼠见不同程度的肾小球内蛋白沉积、肾小管肿胀。（3）眼球组织:FDP正式各小鼠眼球各结构均未见异常。结论:（1）川椒方的急性经口毒性较低,较为安全。（2）最大给药量方法与固定剂量法可得到相同的毒性分级,且后者可节省实验成本,保护实验动物福利。
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