【摘 要】
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目的:研究M3受体激动剂胆碱可抑制急性心肌缺血时心肌细胞钙超载,及其可能的机制。
方法:(1)利用大鼠心肌细胞的分离方法,将正常大鼠Ⅱ型胶原酶消化分离单个心肌细胞,低
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目的:研究M3受体激动剂胆碱可抑制急性心肌缺血时心肌细胞钙超载,及其可能的机制。
方法:(1)利用大鼠心肌细胞的分离方法,将正常大鼠Ⅱ型胶原酶消化分离单个心肌细胞,低pH值(pH6.8)乏氧液模拟缺血环境,利用膜片钳技术研究钙离子通道电流变化,利用激光扫描共聚焦技术记录各组单个心室肌细胞的内钙升高情况,观察M3受体激动剂胆碱对缺血诱发的心肌细胞内钙超载的影响。(2)采用大鼠冠脉左前降支结扎造心肌缺血模型;取心肌组织用免疫印迹方法和real-time PCR法检测心肌缺血区L型钙通道蛋白及RNA的含量。
结果:(1)共聚焦实验结果显示,与正常组(pH7.4)相比,缺血组(pH6.8)细胞内钙升高明显,预先给予胆碱孵育可明显抑制由缺血引起的细胞内钙升高现象,预先给予4DAMP可部分逆转胆碱抑制细胞内钙升高的作用。(2)在膜片钳实验中,与正常组(pH7.4)相比,缺血组(pH6.8)Ica-L明显增高,应用胆碱后Ica-L下降。(3)分子生物学实验表明,模型组钙通道蛋白和RNA水平与正常组相比明显增加,预先给予胆碱可以抑制其升高,4DAMP可阻断胆碱的作用。
结论:;(1)急性缺血时,细胞内钙明显升高,预先给予胆碱保护可以有效抑制缺血引起的细胞内钙升高现象,此作用可以被4DAMP阻断;(2)胆碱保护缺血心肌的可能机制为缺血心肌钙离子通道RNA水平上调、蛋白表达增加,缺血心肌钙离子通道电流增加。
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