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前言 细胞增殖是细胞生命现象的一个重要特征。细胞的增殖与生长发育、分化、再生、创伤修复及肿瘤发生密切相关。肿瘤是一种基因疾病，在当前分子生物学领域中，细胞癌变与细胞信号传导系统、细胞周期调控、细胞的生长和分化，以及细胞凋亡等均有关联。细胞周期调控体系是由真核细胞中专门调控细胞周期的一系列基因的表达产物所组成。参与细胞周期调控有以下几种：1、细胞因子及其受体；2、周期蛋白与周期蛋白依赖性激酶；3、原癌基因及抑癌基因；4、cAMP和cGMP的变化。 成釉细胞瘤（Ameloblastoma，AB）是最常见的上皮性牙源性肿瘤，WHO1992年牙源性肿瘤重新分类中，把AB确定为良性肿瘤，但其局部呈侵袭性生长，易复发、可恶变，有学者称为交界性肿瘤。目前其发病机制和复发原因尚不清楚。最近文献资料显示，目前人们已认识到从某种意义上说，肿瘤是一类细胞周期疾病，肿瘤的发生、发展与细胞周期调控有关。在一个完整的细胞周期，不同时期的细胞周期蛋白（Cyclin）和细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinase，cdk）组成多种特定Cyclin-cdk复合物，由于复合物分解、合成在细胞周期中失调，从而导致癌的发生、发展。多种肿瘤存在着Cyclin的异常表达，cdk的激活及其抑制因子的丢失。AB中存在着细胞周期素的异常，在G1期，Cyclin D1和Cyclin E的异常表达，也有S期Cyclin A的增高，但对Cyclin B和cdk1/p34cda2在AB及角化囊肿（Odontogenic Keratocyte，OKC）中表达尚未见报道。本实验用免疫组化方法，检测AB及OKC中Cyclin、B1和cdkl/p34cdc2表达情况，探讨AB及OKC发生、复发、恶变的临床生物学行为，为今后抗肿瘤治疗及各种酶抑制剂和基因疗法提供有意义的理论依据。 材料与方法 1、标本：选自中国医科大学附属口腔医院及第一临床学院病理科临床活检存档蜡块。其中AB73例（原发犯例，复发33例，恶变8例），OKC19例，口腔正常粘膜7例。10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4林m厚连续切片。全部病例均有完整临床资料并随访。随访时间3召O年。由于染色掉片CyclinB，与p34cd己标本数略有所不同。 2、试剂和方法:行免疫组化S一P法和SABC法染色。CyclinB，为DAKO产品，cdkl单抗（BM0027）、SABC试剂盒购自武汉博士德生物有限公司。S一P超敏试剂盒（kit一7一0）和DAB显色剂（DAB0031）均为Maxim产品，购自福州迈新生物制品有限公司。S一P和SABC法染色参照说明书进行，常规设立阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照。 3、结果判定:CychnB，在细胞核呈现棕黄色颗粒为阳性。低倍镜（x40，xloo）观察确定每例切片，然后在高倍下（xZoo）计数阳性细胞核，采用双盲法，取3个视野的平均值。 用改良打分法半定量分析 p34cda表达，p34“d己的胞质或核出现棕黄色颗粒阳性着色。A（按切片中细胞显色有无及深浅评分）:O分为细胞无色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。B（按切片中显色瘤细胞占切片中瘤细胞的比例评分）:1分为25%以下;2分为25%一75%;3分为75%以上。每例积分二A xB，按积分高低分为:阴性（一）积分O分;弱阳性（+）积分l一4分;强阳性（++）积分>4分。 4、统计学处理:采用SPSS 1 0 .0统计软件，进行ANOVA和卡方检验，P<0.05为有意义。实验结果 CyclinB，的表达在7例正常口腔粘膜中，5例核为阴性，2例核阳性占（28 .6%）。但有4例在上皮棘层细胞膜或浆表达为弱阳性。在19例OKC中核阳性7例（36.8%），且位于棘细胞层，在73例AB中星网状层和外周层核阳性46例（63%），经方差分析，P<0.001。按AB生物学行为分组，AB的复发和恶变核阳性增多，原发AB32例中13例阳性（40 .6%），复发AB 33例核阳性25例（75.8%），恶变ABS例中核阳性8例（100%），三者比较P<0.05有统计学意义。 而cdkl/p34“d‘在正常口腔粘膜、OKC及AB中均有表达，但以胞浆为主，正常口腔粘膜71.4%（5/7），OKC中68.4%（13/19），AB中85.9%（61/7l）为阳性，阳性表达以弱或中度为主。伴随着AB的复发与恶变阳性率及强度无明显改变，原发AB为90.6%（29/犯），恶性AB为85.7%（6/7），统计学上P>0 .05无显著相关性。 AB中滤泡型及丛状型阳性率表达无差异，但与细胞异质性分化有关，AB实性密集增生区细胞核阳性多。3例颗粒型，AB颗粒细胞浆全部为阳性，强阳性1例，弱阳性2例。颗粒细胞周边星网状细胞核阳性，且向间质呈蕾状增生的上皮细胞核中为阳性。同样在AB中角化细胞浆中5例阳性，其中4例为强阳性，1例为中度阳性。同时观察到牙源性上皮剩余核为阳性。16例AB中间充质纤维细胞核呈阳性表达。讨论 细胞周期蛋白（Cyclin）是调节细胞周期活动的重要蛋白质，在细胞的增殖及肿瘤的发生中起着重要作用，其表达水平随着细胞周期进程而改变。已知Cychn和cdk复合体有序形成，其激活和失活是细胞周期调控的主要分子基础，不同类型的周期蛋白存在结构、功能和时相特异性，如人类细胞在Gl期表达3种周期蛋白:CyelinC，D和E。在S期Cyelin灯edkZ复合物控制着DNA复制。在GZ期中CychnB，在胞浆中积聚与edcZ