沙门氏菌病是一种人畜共患病,而且随着抗菌药物的滥用,沙门氏菌耐药性越来越强,使得该病的防控变得越来越复杂。基于六盘水市钟山区鸡沙门氏菌病比较常见,且防控困难的现实,本研究在对六盘水市钟山区沙门氏菌病进行流行病学调查的基础上,开展了沙门氏菌的分离鉴定、药敏试验、耐药基因分析等研究。1.钟山区鸡沙门氏菌病流行病学调查及其病原菌分离与鉴定。本研究于2017年1月～2019年12月期间对两种不同养殖方式的6个养鸡场的鸡群进行定期采样（每两个月采集一次血清样本）,通过平板凝集试验检测沙门氏菌特异性抗体;通过临床症状观察和系统的病理剖检对发病鸡进行初步诊断,然后采集病鸡的肝脏、脾脏、心脏组织样本进行沙门氏菌分离,分别使用普通营养琼脂培养基、营养肉汤和麦康凯琼脂固体培养基进行培养,观察细菌生长状态;通过革兰氏染色观察细菌形态;利用14种生化管对分离菌进行生化特性鉴定;对3株分离菌的16S r DNA基因进行PCR扩增、测序及遗传进化分析。平板凝集试验结果显示,所调查的养鸡场中沙门氏菌平均检出率为22.3%,其中地面平养方式养鸡场的平均检出率为26.4%,笼养方式养鸡场的平均检出率为18.4%,可见地面平养鸡群的沙门氏菌病相较笼养鸡群更为严重。对发病鸡的临床诊断结果显示,病鸡精神萎顿,怕冷且不愿走动,羽毛松乱,翅下垂,腹泻且粪便在泄殖腔周围呈白色浆糊状;剖检可见其肝脏、脾脏等肿大充血,且脾脏表面有结节,腹腔内存在腹水,肠道炎症等,其症状和剖检病变与鸡沙门氏菌病相符。分离培养结果显示,分离菌在普通营养琼脂培养基上的菌落为直径2～4mm,白色半透明、湿润光滑、圆形且边缘整齐,在麦康凯培养基上的菌落为无色透明、圆形隆起,均与沙门氏菌的培养特性一致。革兰氏染色结果显示,分离菌为大小均匀、两端钝圆、无荚膜、无芽孢的红色短杆菌,符合典型的沙门氏菌革兰氏染色特征。生化试验结果显示,分离菌在硫化氢、甲基红、枸橼酸盐、葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、山梨醇、木胶糖等生化试验中均表现为阳性反应,与沙门氏菌生化特性相符。PCR结果显示,3株分离菌的PCR产物经过电泳后,均在约1 550 bp处出现特异性目的条带,与预期的目的基因大小一致,而阴性对照无条带出现。测序结果与沙门氏菌参考株对比显示,虽然3株分离菌的16s r DNA基因与沙门氏菌参考株有差异,但总体上高度相似。遗传进化树分析显示,3株分离菌与沙门氏菌在同一个分支上。以上结果表明,分离的3株细菌均为沙门氏菌。2.沙门氏菌分离株的耐药性研究。采用药敏纸片法测定已分离鉴定的3株沙门氏菌菌株（分别命名为1、2和3号菌株）对10种抗菌药物的敏感性。同时对沙门氏菌的10对耐药基因进行PCR扩增、测序、同源性及遗传进化分析。药敏试验结果显示,3株沙门氏菌菌株对β-内酰胺类药物阿莫西林、青霉素及大环内酯类药物红霉素耐药,对氨基糖苷类药物链霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素类药物强力霉素、β-内酰胺类药物羧苄西林、喹诺酮类药物恩诺沙星及磺胺类药物复方新诺明敏感。耐药基因分析结果显示,β-内酰胺类blatem-1耐药基因在3株沙门氏菌菌株中均出现特异性目的条带,氯霉素类Cml A耐药基因仅在3号菌株中出现特异性目的条带,其余耐药基因均未检出。blatem-1耐药基因同源性分析结果显示,3株沙门氏菌blatem-1耐药基因与参考株同源性在98.3%～98.6%之间。blatem-1耐药基因的系统进化树分析结果显示,3个沙门氏菌菌株blatem-1耐药基因存在一定程度的差异性,但总体上遗传进化关系较近。3号菌株携带的氯霉素类Cml A耐药基因与参考株基因同源性均为100%,Cml A耐药基因系统进化树分析显示,3号菌株与参考菌株均处于同一分支,表明3号菌株Cm1A耐药基因高度保守。综上所述,本试验在对钟山区鸡沙门氏菌病进行流行病学调查的基础上,成功分离并鉴定出了3株沙门氏菌菌株;分离菌耐药性研究结果表明,该3株沙门氏菌菌株对部分β-内酰胺类、大环内酯类药物耐药,对氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类药物敏感,3株沙门氏菌菌株中均存在β-内酰胺类blatem-1耐药基因,3号菌株中还存在氯霉素类Cml A耐药基因。