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目的:本研究建立以转化生长因子(TGF)-β1为刺激源的人肝星状细胞(HSC-LX-2)模型,研究不同剂量的甲基阿魏酸(meth-ferulic acid,MFA)对HSC-LX-2干预后NADPH氧化酶4(Nox4)的表达、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达、Ⅰ型前胶原(PCⅠ)表达的影响。方法:体外培养HSC-LX-2为正常对照组,采用1μg/L TGF-β1刺激HSC-LX-2进行细胞造模为模型组。根据MTT法分别检测不同浓度MFA对HSC-LX-2增殖抑制作用及对人肝细胞(L-O2)的细胞活性的影响。根据MTT结果综合选择合适的MFA作用HSC-LX-2的浓度,药物剂量组分为低剂量组1.25 mg/L、中剂量组2.5mg/L、高剂量组5.0 mg/L。将正常组、模型组及药物作用低剂量组、中剂量组、高剂量组,孵育72 h后,采用RT-PCR法检测各组中Nox4、α-SMA、PCⅠmRNA的表达,采用原位装载探针法检测细胞内ROS的水平,采用Western blot技术检测各组中Nox4、α-SMA蛋白的表达,采用ELISA法检测各组中PCⅠ蛋白的表达。结果:1、采用MTT法检测MFA对HSC-LX-2增殖抑制作用及L-O2细胞活性的影响。当MFA浓度范围在(0.312 5～5mg/L)之间,随着MFA浓度升高,HSC-LX-2细胞生长抑制率逐渐升高,而L-O2吸光光度值较正常组升高,即低浓度MFA可促进L-O2生长。当MFA浓度范围在(10～40 mg/L)之间,随着MFA浓度增高,HSC-LX-2生长抑制率逐渐降低,L-O2的吸光光度值较正常组下降明显,即高浓度的MFA可抑制L-O2的生长。因此我们选用MFA剂量相对较小,抑制率相对较高的MFA处理组(1.25、2.5、5.0 mg/L),各组间差异有统计学意义(P<0.05)。2、采用RT-PCR法及Western blot技术检测HSC-LX-2细胞Nox4 mRNA及蛋白表达结果。随着MFA浓度逐渐增高,Nox4的mRNA及蛋白表达水平逐渐降低。5.0 mg/L的MFA组的Nox4的mRNA及蛋白表达水平均低于1.25mg/L组和2.5 mg/L组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。3、采用原位装载探针法检测HSC-LX-2内ROS水平的结果。随着MFA浓度逐渐升高,HSC-LX-2内的荧光强度逐渐减弱,含绿色荧光的细胞个数减少。与正常对照组相比,模型组的荧光较强。4、采用RT-PCR法及Western blot技术检测HSC-LX-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达结果。随着MFA浓度逐渐增高,α-SMA的mRNA及蛋白表达水平逐渐降低。5.0 mg/L的MFA组的α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均低于1.25 mg/L组和2.5 mg/L组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。5、采用RT-PCR法及ELISA法检测PCⅠ的mRNA及蛋白表达结果。MFA作用HSC-LX-2细胞72h后,随着MFA浓度逐渐增高,HSC-LX-2细胞PCⅠ的mRNA及蛋白表达水平逐渐降低。5.0 mg/L的MFA组的PCⅠ的mRNA及蛋白表达水平低于1.25 mg/L组和2.5 mg/L组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、MFA能抑制HSC-LX-2细胞的增殖。MFA浓度范围从0.3125mg/L到5mg/L之间呈剂量依赖性改变,抑制作用表现为随浓度增加而增强。而MFA浓度范围从10mg/L到40mg/L之间,抑制作用表现为随浓度增加而减弱。2、MFA干预HSC-LX-2细胞可以下调Nox4/ROS、α-SMA及PCⅠmRNA和蛋白水平的表达,且5.0 mg/L的药物剂量组中的Nox4、α-SMA及PCⅠ的mRNA及蛋白表达水平低于其他组。结果表明MFA可能通过下调Nox4、α-SMA及PCⅠ的表达及ROS水平从而抑制HSC-LX-2细胞外基质(ECM)的合成,抑制HSC-LX-2表型的转化,发挥抗肝纤维化作用。