【摘 要】
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目的:本课题对人参糖蛋白（panax ginseng glycoproteins,PGG）进行改善少弱精症的研究,并将其制备成肠溶微丸,评价药效。方法:（1）采用醇提、水煎、超滤、透析方法提取PGG（2）采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法和Lowry法对PGG进行理化性质测定（3）采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）测定PGG分子
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目的:本课题对人参糖蛋白（panax ginseng glycoproteins,PGG）进行改善少弱精症的研究,并将其制备成肠溶微丸,评价药效。方法:（1）采用醇提、水煎、超滤、透析方法提取PGG（2）采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法和Lowry法对PGG进行理化性质测定（3）采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）测定PGG分子量分布（4）采用HPLC法测定PGG单糖和氨基酸组成（5）采用甲基化法测定PGG糖苷键连接方式（6）对精子总数、精子活率、精子畸形率和精子活力进行检查,观察精子形态（7）采集小鼠睾丸（双）、前列腺+贮精囊（双）、包皮腺（双）和提肛肌称重,进行脏器系数计算（8）对小鼠睾丸进行组织病理学检查（9）采用ELISA法（Enzyme-linked immunosorbent assay）测定小鼠血清中睾酮（Testosterone,T）、卵泡刺激素（Follicle-stimulating hormone,FSH）和催乳素（Prolactin,PRL）水平（10）采用单因素考察和正交试验确定PGG肠溶微丸最佳制备工艺,并进行体内药效评价。结果:（1）PGG中性糖含量为44.76%、酸性糖含量为4.24%、蛋白质含量为49.59%（2）PGG重均分子量为7037 Da,分子量范围为1203-15394 Da（3）单糖组成:Man、Rha、Gal A、Glc、Glc NAc、Gal NAc、Gal、Fuc,氨基酸组成:Asp、Thr、Ser、Glu、Gly、Ala、Val、Met、Ile、Leu、Phe、His、Lys、NH4、Arg（4）PGG糖链主链:→2)-Man-（1→,→4）-Rha-（1→,→4）-Fuc-（1→,→6）-Gal-（1→,→3）-Gal-（1→,→4）-Gal A-（1→,→4）-Glc NAc-（1→,→4）-Gal NAc-（1→,支链:→3,6）-Man-（1→,2,6）-Man-（1→,2,5）-Man-（1→,末端:1→）-Fuc,1→)-Glc,1→)Glc NAc or 1→)-Gal NAc（5）与正常组比较,模型组小鼠精子总数降低（P＜0.01）、精子活率降低（P＜0.01）、精子畸形率升高（P＜0.01）、精子活力降低（P＜0.01）、睾丸,前列腺+贮精囊脏器系数降低（P＜0.05或P＜0.01）、包皮腺,提肛肌脏器系数无明显影响（P＞0.05）、生精细胞层厚度与横截面面积减小（P＜0.01）、血清中T、FSH、PRL水平降低（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组比较,中、高剂量给药组小鼠精子总数升高（P＜0.05）、精子活率升高（P＜0.01）、精子畸形率降低（P＜0.05或P＜0.01）、精子活力升高（P＜0.05或P＜0.01）、各脏器系数无明显影响（P＞0.05）、生精细胞层厚度与横截面面积增加（P＜0.05或P＜0.01）、血清中T、FSH、PRL水平升高（P＜0.05或P＜0.01）（6）PGG肠溶微丸最佳制备工艺:以微晶纤维素为稀释剂、药辅比为70%、60%乙醇为黏合剂、滚圆转速100 r·min-1、挤出转速40 r·min-1、滚圆时间9 min,包衣增塑剂、防黏剂用量为聚合物含量的15%和45%、增重20%,且PGG肠溶微丸在体内药效优于PGG。结论:明确了PGG基本性质与结构、具有改善生精障碍的作用,其作用机制可能与性激素水平的表达有关,制备成肠溶微丸,为开发治疗少弱精症药物奠定基础。
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