论文部分内容阅读
阿尔茨海默症是一种在老年人中常见的中枢神经退行性疾病。研究表明Aβ1-42是一种可以自身聚集成高聚的多肽,其聚集对于阿尔茨海默症的发生、发展是至关重要的。我们将Bcl-xL蛋白的一段无结构序列用Aβ1-42替代,并在Aβ1-42序列的两端各插入一个酶切位点。通过之前的研究表明Aβ1-42被锁定在一个单体的状态。通过酶切位点的构建,我们可以将单体的Aβ1-42酶切下来。通过比较加入化合物之后ThT荧光的变化,可以判断化合物是否能够抑制Aβ1-42的聚集。通过这种筛选方法,我们成功发现了一个新的Aβ1-42小分子抑制剂。
SirT1(沉默信息调节因子2相关酶1)是一类NAD+(腺嘌呤二核苷酸)依赖性去乙酰化酶。烟酰胺是SirT1催化的去乙酰化反应的产物,也是SirT1的一种非竞争性抑制剂。我们利用蛋白同源模建和分子对接方法构建了“SirT1/NAD+/p53乙酰化多肽”和“SirT1/ADPR(二磷酸腺苷核糖)/烟酰胺”的两种复合物结构模型。根据“SirT1/NAD+/p53乙酰化多肽”的复合物模型,我们发现SirT1的残基Ser265和Asn346与NAD+有相互作用,Ser275位于NAD+结合口袋的入口处。我们通过酶动力学实验证明:将Ser265、Asn346和Ser275突变之后会降低甚至消除NAD+与SirT1的相互作用。另外,根据“SirT1/ADPR/烟酰胺”的复合物模型,烟酰胺的酰胺基团与残基Ile347、Asp348形成了氢键,同时其嘧啶环埋在由Ala262、Ile270、Phe273、Ile316和Ile347所包围的疏水环境中。将Ile316突变成丙氨酸,提高了酶与烟酰胺的结合能力也显著提高了烟酰胺的抑制活性,这一现象表明烟酰胺结合在SirT1的C口袋处。
我们利用实验室现有的实验条件,纯化表达的HDAC8蛋白,通过参考其它文献将p53的一段序列作为底物建立了HDAC8的小分子抑制剂筛选模型,通过阳性化合物TSA的检测判断这个筛选模型准确可靠,通过这个筛选模型又筛选出了6个由同一母核衍生而来的化合物对于HDAC8有抑制作用。我们又通过突变体的实验将HDAC8的39位和141位进行突变,发现这两个突变体丧失了去乙酰化能力,说明这两个位点对HDAC8的去乙酰化作用用着重要的作用。