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核受体超家族是一类配体依赖性反式作用因子,广泛参与机体基因的表达调控,在胚胎发育、细胞分化和内环境稳定过程中起重要作用。雌激素受体相关受体(ERRα1)是最早发现的孤儿核受体,它能与多种基因上游的雌激素受体相关受体激素反应元件(ERRE)结合,可能调节甲状腺素受体α、骨桥结合素、乳铁蛋白和芳香族化酶等基因的表达。ERRα1 表达于正常乳腺组织,且高表达于乳腺癌组织;过表达ERRα1 能抑制MCF-7 乳腺癌细胞增殖和乳腺癌细胞中ERα介导的转录活化功能,表明ERRα1 和乳腺癌有密切关系。在调节相关靶基因的转录过程中,核受体不但需要与配体和DNA(顺式作用元件)结合,而且需要招募辅活化子。大部分类固醇激素受体如雌激素受体,通过配体结合结构域上转录激活结构域(AF2)与辅调节蛋白结合。但是,对ERRα1 与核受体辅活化子结合有关的ERRα1 的结构域和氨基酸残基的了解十分有限。调查ERRα1 与核受体辅活化子结合的结构基础有助于了解ERRα1 的特性以及它的功能。在找寻乳腺组织中与ERRα1 相互作用蛋白时,我们实验室采用酵母双杂交技术筛选了人乳腺组织cDNA 表达文库中和ERRα1 相互作用的蛋白质,结果筛选到全长的E3B1(Eps8-SH3-domain binding protein-1)基因。近年来研究显示E3B1 与肿瘤有着非常紧密的联系,它在机体扮演着细胞增殖分化的负性调控角色。但是,E3B1 抑制细胞增殖的机制并不清楚。由于E3B1 是ERRα1 的相互作用蛋白,ERRα1 在乳腺癌发病中起重要作用,因此,进一步深入研究E3B1 在乳腺癌中的作用,有助于更好了解ERRα1 对乳腺癌细胞的作用的分子机制。基于以上分析,为了深入了解ERRα1 结构与功能的关系以及E3B1 对乳腺癌的作用机制,我们进行了本课题研究,主要研究目标和结果如下: 1. ERRα1 结构与功能: 1)为了阐明ERRα1 结构与功能的关系,我们分析了ERRα1 的保守区域和保守氨基酸,设计了相应的ERRα1 缺失体,并对潜在的重要氨基酸进行突变设计,旨在通过分析突变体功能的变化来反应ERRα1 结构与功能的关系。2) 鉴定了ERRα1 的与核受体辅活化子PNRC (Proline-rich nuclear receptor