干细胞序贯移植中脱敏疗法诱导第三方免疫耐受的研究

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目的:探讨建立小鼠异基因造血干细胞移植模型后,神经干细胞经脱敏步骤,再次移植神经干细胞入小鼠体内免疫耐受及安全性进行初步探索。  方法:第一部分:异基因移植模型的建立,在致死性全身照射(total body irradiation,TBI)8.0Gy预处理方案下,6-8周龄 BALB/C小鼠首先被随机分成3组(n=10只/组):A组空白对照组小鼠仅行放射线治疗;B组小鼠照射后给予胎鼠及新生鼠外周血(fetaland neonatal murine peripheral blood,FNPB)治疗;C组小鼠照射后给予骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)治疗;比较造血干细胞移植模型生存率。第二部分:异基因移植模型脱敏处理,Ⅰ组小鼠照射后给予造血干细胞移植(hematopoietic stem celltransplantation,HSCT),神经干细胞(neural stem cell,NSC)脱敏和脑实质注射NSC;Ⅱ组小鼠照射后给予 HSCT,口服环孢素 A(Cyclosporin A,CsA),脑实质注射 NSC;Ⅲ组小鼠照射后给予 HSCT治疗,21天后脑实质注射 NSC。分析各组小鼠存活期、死亡率、外周血白细胞计数、体重、临床表现,并采用流式细胞技术检测各组小鼠嵌合水平,对小鼠大脑组织行冰冻切片,免疫组化染色并采用体视学系统计数神经干细胞移植的存活情况。  结果:每只C57BL/6孕鼠平均采集到MNC数为(2.5±0.4)×106,每只C57BL/6小鼠平均采集骨髓细胞(1±0.4)×107。动物于移植后无明显 GVHD表现,BMT移植组存活率较高。彻底清髓与适宜的移植物为植入的关键因素。脱敏后移植 NSC存活细胞比例与CsA组类似,直接进行NSC移植的对照组存活细胞明显下降。  结论:HSCT治疗对清髓放射线预处理小鼠造血系统和免疫系统重建起到控制和改善的作用,神经干细胞脱敏步骤促进了后续治疗性神经干细胞移植的耐受。
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