目的通过对不同品种、规格与等级鹿茸饮片“辨状论质”的性状特征的量化表征,结合主要化学成分含量分析,应用聚类分析与主成分分析方法,分别对鹿茸饮片“辨状论质”的科学内涵与实际意义进行研究。材料与方法1样品收集:不同品种、规格与等级药材饮片22批,其中梅花鹿茸饮片20批,马鹿茸饮片2批。2方法2.1鹿茸饮片“辨状论质”性状指标量化研究2.1.1鹿茸饮片的形状及质地表征2.1.1.1形状表征:采用游标卡尺,对各样品饮片的短轴与长轴进行测量,用“圆度”(?)作为指标,以量化鹿茸饮片的形状特征。2.1.1.2质地表征:采用堆沙法,对各样品饮片进行测定,用密度(?)作为指标,以量化鹿茸饮片的质地特征。2.1.2鹿茸饮片的透光率表征:采用LS116透光率测试仪,对各样品鹿茸饮片的透光率进行测定,以透光率(T%)对鹿茸饮片光泽性进行量化表征。2.1.3鹿茸饮片的颜色表征:采用CS-600色彩色差计,对各样品鹿茸饮片的内、外颜色特征参数L*、a*、b*的值进行测定,并分别计算内部、外部及“E*ab”总色度,量化鹿茸饮片的颜色特征。2.1.4鹿茸饮片的气表征:采用PEN 3电子鼻系统,对各鹿茸饮片的“气”进行测定,通过对10个传感器响应信号的变化曲线、每个时间点的信号值及星型雷达图或柱状指纹图,解析鹿茸饮片“气腥”的本质;并以主成分分析法(PCA),线性判别法(LDA)和传感器区别贡献率分析法(Loadings)等分析方法,对比不同品种、规格与等级鹿茸饮片“气”的异同。2.2鹿茸饮片“辨状论质”化学成分研究2.2.1水溶性蛋白质与氨基酸类成分分析:分别采用考马斯亮蓝G-250显色,分光光度法及柱前衍生化高效液相色谱法,以牛血清白蛋白及天冬氨酸等18种氨基酸为对照,对各样品饮片中的水溶性蛋白质及氨基酸类成分进行测定。2.2.2总磷脂含量测定:采用钼蓝显色剂显色,以磷酸二氢钾为对照,分光光度法测定各样品饮片中总磷脂的含量。2.2.3总多糖含量测定:采用苯酚-硫酸法显色,以D-无水葡萄糖为对照,分光光度法测定,对各样品饮片中总多糖含量进行测定。2.2.4核苷类成分分析:采用HPLC法,以尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷为对照,测定各样品饮片中四种核苷类成分的含量。2.2.5胆固醇含量测定:采用HPLC法,以胆固醇为对照,对各样品饮片中胆固醇含量进行测定。2.3鹿茸饮片“辨状论质”综合分析与评价2.3.1聚类分析:采用聚类分析方法对上述实验数据进行标准化处理及分析,以期得到鹿茸饮片更合理的分类方法。2.3.2主成分分析:采用主成分分析方法对上述实验数据进行数据规格化处理并分析,以判断各指标对鹿茸饮片分类与质量评价的贡献率,并筛选出最优的标示鹿茸饮片质量的指标。结果1鹿茸饮片“辨状论质”性状指标量化研究1.1鹿茸饮片的形状及质地表征1.1.1形状表征:“蜡片”圆度范围在0.85~0.93,“蜡粉片”圆度范围在0.89~0.90,“粉片”圆度范围在0.79~0.83,“血片”圆度范围在0.79~0.89,“白片”圆度范围在0.76~0.86,各规格饮片的圆度值具有差异性,与各规格的形状相关。其中,马鹿茸血片圆度较梅花鹿略大,白片圆度较梅花鹿略小。1.1.2质地表征:“蜡片”密度为1.061~1.310,“蜡粉片”密度为0.914~1.240,“血片”密度为0.565~1.034,“白片”为0.646~0.990,“粉片”为0.833~1.039。其中蜡片密度最大,蜡粉片略小于蜡片,其次为粉片,血片与白片的密度接近,即从鹿茸尖端到根部密度逐渐变小;马鹿茸白片密度略大于梅花鹿白片,马鹿茸血片与梅花鹿血片较接近。1.2鹿茸饮片的透光率表征:“蜡片”透光率为0.6%~3.3%,“蜡粉片”透光率为1.1%~2.0%,与蜡片较接近。“血片”的透光率为0.2%~10.4%,“白片”的透光率为12.2%~26.6%,“粉片”的透光率为1.8%~7.2%。蜡片与蜡粉片透光率较小,粉片次之,血片小于白片,白片透光率最大;马鹿茸血片、白片的透光率均小于梅花鹿血片与白片。1.3鹿茸饮片的颜色表征:同一样品总色度,粉末颜色总色度值大于饮片表面颜色总色度值,饮片表面颜色总色度值“蜡片”在54.35~63.37,“蜡粉片”在61.05~63.17,“血片”在27.97~45.48,“白片”在64.38~71.60,“粉片”在46.36~67.91;粉末颜色总色度值“蜡片”在64.77~83.49,“蜡粉片”在73.24~73.95,“血片”在55.97~64.11,“白片”在71.23~82.78,“粉片”在66.07~75.18。其总色度值由大到小均为白片最高,蜡片与蜡粉片相近,其次是粉片,血片最小。1.4鹿茸饮片的气表征:通过测定“气”表征,可区分开梅花鹿茸与马鹿茸两个品种饮片,梅花鹿不同规格之间,可明显区分开蜡片、蜡粉片、血片、白片,白片与粉片存在重叠部分,区分不是很明显;马鹿茸不同规格之间可以很好的区分开;各规格不同等级之间无法区分。2鹿茸饮片“辨状论质”化学成分研究2.1水溶性蛋白质与氨基酸类成分分析2.1.1水溶性蛋白质含量测定:各鹿茸饮片的水溶性蛋白质含量存在一定差异性,“蜡片”水溶性蛋白质,在0.71%~1.5%,“蜡粉片”为0.83%~0.84%,“粉片”为0.76%~0.88%,“血片”为0.62%~0.92%,“白片”为0.49%~0.74%;蜡片含量最高,蜡粉片次之,其次为粉片,血片略大于白片。2.1.2氨基酸类成分分析:不同品种、规格与等级的鹿茸饮片中游离氨基酸种类与含量均较少,在水解氨基酸中,所有鹿茸饮片中均含有17种氨基酸及7种人体必需氨基酸,色氨酸(Trp)均未检出,其中“蜡片”为44.9%~54.3%,“蜡粉片”为37.5%~53.2%,“血片”为31.4%~38.1%,“白片”为28.5%~43.1%,“粉片”为25.0%~38.3%;“蜡片”含量最高,“蜡粉片”次之,其次是白片、粉片、血片。2.2总磷脂含量测定:各鹿茸饮片中“蜡片”总磷脂含量为1.50%~1.71%,“蜡粉片”为1.01%~1.06%;“血片”为0.87%~1.19%,“白片”为0.89%~0.99%,“粉片”为0.89%~1.16%,其中蜡片含量最高,蜡粉片次之,血片略高于粉片,白片含量最低。马鹿茸血片与白片与梅花鹿差异不明显。2.3总多糖含量测定:各样品鹿茸饮片中总多糖含量存在差异性;蜡片含量最高,蜡粉片次之,血片与白片含量接近,粉片含量最低;“蜡片”总多糖含量为1.09%~1.21%,“蜡粉片”为1.04%,“血片”为0.40%~0.61%,“白片”为0.29%~0.57%,“粉片”为0.36%~0.46%。2.4核苷类成分含量测定:各样品鹿茸饮片均检出尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷,4种核苷类成分,且4种核苷的总量存在一定差异;“蜡片”为2.019~3.014 mg·g-1,“蜡粉片”为2.136~2.138 mg·g-1,“血片”为1.169~1.498 mg·g-1,“白片”为0.9677~1.579mg·g-1,“粉片”为0.9156~1.691 mg·g-1;含量由高到低为蜡片、蜡粉片、粉片、白片、血片;不同品种之间差异并不明显。2.5胆固醇含量测定:各样品鹿茸饮片中均检出胆固醇成分,“蜡片”中胆固醇含量在0.7837~1.1255 mg·g-1,“蜡粉片”在0.8431~0.8807 mg·g-1,“粉片”在0.2851~0.3934mg·g-1,“血片”在0.2794~0.3362 mg·g-1,“白片”在0.3187~0.7358 mg·g-1;总体来看,含量由高到低为蜡片、蜡粉片、白片、粉片、血片;马鹿茸白片胆固醇含量略高于梅花鹿,血片与梅花鹿血片差异并不显著。3鹿茸饮片“辨状论质”综合分析与评价3.1聚类分析:经过对性状特征和化学成分表征数据进行聚类分析,所有鹿茸饮片被分成4类,即“蜡片”与“蜡粉片”为一类,“血片”为一类,“白片”为一类,“粉片”为一类。3.2主成分分析:通过对不同品种、规格与等级的鹿茸饮片的12个指标进行主成分分析,提取出3个主成分,最终筛选出标示鹿茸饮片质量的最优指标是水解氨基酸总量、总磷脂含量、总多糖含量、胆固醇含量、饮片表面与内部总色度。结论1分别以“圆度”、“密度”、“透光率”、“色度”、“电子鼻传感器响应值”等,对鹿茸饮片“辨状论质”的性状特征进行了量化表征,解决了鹿茸饮片传统“辨状论质”中对饮片形状、质地、颜色、光泽、气腥等描述的主观、模糊的瓶颈问题。2鹿茸饮片的腥气由有机和无机硫类物质,甲烷等短链烷烃类、小分子氮氧化合物以及醇醚醛酮类物质组成;梅花鹿茸与马鹿茸两种鹿茸饮片可采用电子鼻方法进行鉴别。3从化学成分的角度,分别以蛋白质、氨基酸类、核苷类、总磷脂、总多糖、胆固醇等含量对鹿茸饮片“辨状论质”的物质基础进行了量化表征,为解决鹿茸饮片质量控制的问题提供理论依据。4通过对鹿茸饮片“辨状论质”量化指标的聚类分析与主成分分析,筛选出了决定鹿茸饮片“辨状论质”中规格与等级划分的主要因素,即水解氨基酸总量、总磷脂含量、总多糖含量、胆固醇含量、饮片表面与内部总色度等,进而诠释了鹿茸饮片“辨状论质”的精髓与科学内涵。5从化学成分的角度,鹿茸饮片可划分成“蜡片”、“粉片”、“血片”、“白片”等规格,各规格饮片除“蜡片”外其余规格中的等级划分,多不具有实际意义,因此,可不进一步划分;“蜡片”的等级可分为两等,一等即“蜡片”,二等即“蜡粉片”。