DNA信号放大技术与新型纳米材料在生物传感器中的应用

来源 :江西科技师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ynkm8899
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
生物传感器具有成本低、分析速度快、选择性好、灵敏度高、能够在复杂的体系中进行在线连续监测等优点,在分析化学和生命科学等领域具有广阔的应用前景。DNA信号放大技术和纳米材料在生物传感领域的广泛应用和取得的成果,为研究者提供了更多的传感设计思路。本论文的研究工作基于DNA信号放大技术与新型纳米材料荧光聚多巴胺纳米颗粒(PDA NPs)、铽离子金属有机框架(Tb MOF)、牛血清白蛋白包覆金纳米团簇(BSA@Au NCs)等构建了一系列灵敏、简易、低成本的定量分析疾病标志物的检测方法,内容如下:尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)是起着基本碱基切除修复作用的典型的DNA糖基化酶,人体的神经性疾病、人类免疫缺陷类疾病、淋巴瘤和布鲁姆综合症等疾病的发生都与人体内UDG异常表达联系紧密。在第2章中,开发一种新的基于3’-5’外切酶活性的EndoⅣ循环信号放大策略(EAECSA)用于高灵敏尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)活性检测。在这种方法中,UDG有效地切除带有一个尿嘧啶核苷酸的发夹探针,产生一个无嘧啶位点(AP位点)。AP位点被EndoⅣ切割,一个较短的DNA探针被释放,通过形成三通结构触发EAECSA策略,致使检测探针被大量酶切释放出标记FAM的单个碱基。由于FAM标记的单碱基与GO之间的相互作用极弱,观察到较强的荧光信号。相反,当UDG缺失时,发夹型探针不能被酶切,三通结构没有形成,检测探针没有被酶切,因此,检测探针的荧光团被氧化石墨烯有效淬灭,检测到的荧光信号可以忽略。所设计的EAECSA技术的检出限为7.0×10-4 U m L-1,并且可用于UDG抑制剂筛选和细胞裂解液中目标物的分析检测。该策略为等温核酸扩增提供了一种新的方法,并有望在UDG谱分析和相关疾病诊断中得到应用。碱性磷酸酶(ALP)在人体的肾脏、骨骼、肝脏和胎盘等器官中的含量较高,器官内ALP的浓度出现不同于人体正常水平的情况与糖尿病、肝炎、癌症等相关疾病密切相关。近年来,荧光PDA NPs逐渐成为一种新型的生物聚合物纳米探针,并已成功地应用于生物传感和生物成像领域。第3章在氢氧化钠溶液(Na OH,p H=11)中合成了荧光聚多巴胺纳米粒子(PDA NPs),并以PDA NPs为有效的信号报告因子,构建了一种新型的检测碱性磷酸酶(ALP)的荧光纳米平台。ALP酶解底物L-抗坏血酸-2-磷酸(AA2P)得到L-抗坏血酸(AA),AA与汞离子(Hg2+)可以发生氧化还原反应,基于此构建了该纳米平台。Hg2+可通过与PDA NPs表面官能团的配位作用有效淬灭PDA NPs的荧光。但AA的加入大大抑制了淬灭效果。在此基础上,可以通过底物AA2P水解成AA,以PDA NPs的荧光信号变化作为输出来检测ALP的活性。该纳米平台对ALP的检测具有较高的灵敏度和良好的选择性。该传感器的线性范围为0-18 U L-1,检测限为0.4 U L-1。该方法不仅可用于ALP抑制剂的筛选,还可用于血清样品中ALP活性的检测。此外,该策略可以很容易地扩展到参与AA生成反应的其他种类的酶。肝素(Hep)在静脉血栓栓塞、炎症和血液凝固等生理过程扮演着重要的角色,多硫酸软骨素(CS)则是软骨、骨骼、韧带等脊椎动物组织的重要组成成分。它们在许多生物系统中发挥重要作用,并且广泛应用于临床。在第4章的研究工作中,设计了一种基于绿光发射金属有机铽(Tb MOF)和红光发射的牛血清白蛋白包覆金纳米团簇(BSA@Au NCs)的双发射反变比率型荧光纳米平台,用于Hep和CS的荧光和比色双模式分析检测。当过量的Tb MOF与BSA@Au NCs混合时,Tb MOF与BSA@Au NCs通过静电作用可在离心过程中形成纳米团聚物,在254 nm紫外灯下,上清液因只含有Tb MOF而呈现亮绿色。然而,由于Tb3+与Hep和CS有较强的亲和力,引入Hep或CS导致Tb MOF分解,使BSA@Au NCs释放到上清液中。在254 nm紫外照射下,检测到BSA@Au NCs的红色荧光,Tb MOF的绿色荧光消失。双发射反变比率型荧光纳米平台具有两种不同波长下的发射强度比变化以及对应的绿-红荧光颜色变化,因此,可以利用荧光分光光度计和智能手机分别对Hep和CS进行荧光和比色分析。该比率型荧光纳米探针可以简单、快速地检测Hep和CS,并且检测结果具有较高的灵敏度、选择性和准确性。此外,该方法还成功地用于人血清中Hep和CS的分析检测,证明该荧光纳米平台在生物医学诊断中Hep和CS的分析检测方面具有潜在的应用前景。
其他文献
InGaN和AlGaN是GaN基LED器件中的关键材料,但目前对InGaN和AlGaN热输运性质的研究还比较少,且多集中于热导率的测量和LED器件的设计,缺乏对材料热导率变化机理的系统探索。本文采用第一性原理计算方法结合声子玻尔兹曼输运方程,围绕GaN、InGaN和AlGaN的热输运问题,从晶体结构、热导率的声子贡献、声子输运性质和电子性质等方面进行了深入研究,本文研究结果揭示了GaN合金材料热导
学位
本学位论文引入了F-分配偏序集的概念,讨论了它的一些性质,并研究了几类代数偏序集之间的关系。首先证明了偏序集p是F-分配的当且仅当由P中所有有限集生成的cut构成的集族也是F-分配的;然后讨论了预代数偏序集和Frink拟代数偏序集之间的关系,证明了偏序集P是预代数的当且仅当P是交预连续和Frink拟代数的;最后讨论了强代数偏序集和广义强代数偏序集之间的关系,证明了偏序集P是强代数的当且仅当P是预代
学位
本学位论文主要利用Nevanlinna值分布理论和Hadamard因子分解定理研究了两类Fermat型微分差分方程解的精确表达式。该论文的主要内容包括:第1章引言介绍了研究的背景和研究意义。第2章预备知识介绍了 Nevanlinna理论和微分、差分领域的相关知识。第3章我们主要研究了 Fermat型微分差分方程ω"(z)~2+[P(z)(d1ω(z+c)+d0ω(z))]~2=Q(z)和 Ferm
学位
跨膜蛋白通常需要在脂质双分子层中形成稳定的寡聚物以激活某些特定的生物功能,例如:部分配体只与跨膜蛋白的二聚物结合以调控特定信号在脂质双分子层中的运输。癌症、糖尿病和囊性纤维化等疾病都与寡聚物模态造成的受体功能障碍直接相关。建立一套基于跨膜蛋白序列的寡聚物模态及其基序预测算法,对理解跨膜蛋白的生物功能及其靶向药物的研发有着重要意义。许多基于模式识别与机器学习理论的寡聚物模态预测模型和基序搜索算法被提
学位
微表情是一种自发的、不易发现的、动作幅度小、持续时间短的人脸表情,广泛应用于司法侦查,医学诊断等领域。传统的机器学习算法识别率低,而将深度学习用于微表情识别任务时,通常选择增加卷积神经网络的宽度、深度以及丰富感受野等策略来提高识别率。但是由于微表情数据集样本规模较小,这些策略对提升微表情识别深度模型的效果有限。近年来,随着基于卷积神经网络研究的不断发展,迁移学习和注意力机制的应用成为提高深度网络泛
学位
镁(Mg)和硅(Si)作为p型和n型氮化镓(Gallium Nitride,GaN)的典型掺杂剂,被广泛用于GaN基光电器件中。在光电器件的实际应用中,器件的性能和寿命主要取决于有源区的散热效率。实验上发现,Mg和Si掺杂后,GaN热导率急剧下降,然而其中的物理机理并不清楚。深入探究Mg和Si掺杂GaN的热输运性质,理解GaN掺杂导致热导率下降的物理机制,对提高器件的性能,延长器件的寿命具有非常重
学位
作为人脸图像分析的一个重要分支,微表情识别任务属于计算机视觉(Computer Vision,CV)领域中的一种十分重要的子任务,在国防安全、司法刑侦、临床医学、教学评估等方面都有着广泛的应用。微表情持续时间短(1/25s至1/3s之间),运动强度低,且不易被鉴别。随着互联网技术的不断进步和发展,自动面部微表情识别已经成为一个十分重要的研究方向。目前常见的微表情识别方法主要包括两大类:基于手动特征
学位
近年来,可见光驱动的光致氧化还原催化由于其绿色、温和和可持续的特性,受到了有机化学家的广泛关注。通过将可见光转化为化学能,一系列小分子的化学转化得以在常温下实现。其中,将光氧化还原催化和过渡金属催化结合,开发新型催化反应是光化学研究中极其重要的一个方面,也是有机金属化学的重要研究内容。钴(Co)储量丰富、廉价低毒,存在多种连续的氧化态(0,+1,+2,+3),易发生单电子和双电子氧化还原过程。并且
学位
鸣禽鸣唱是与人类语言相似的发声学习行为,其中雄鸟的鸣曲复杂且规律,雌鸟则只能简单鸣叫。鸣禽已成为研究发声学习的重要模型,其习得性的发声行为受脑中一组鸣唱控制核团的调控,且鸣唱控制核团的结构和功能具有明显的性别差异。弓状皮质栎核RA是鸣禽鸣唱的前运动核团,直接控制鸣曲的输出信息。RA不仅接受发声运动通路的高级发声中枢HVC的突触传入,也接受控制鸣唱学习的前端脑通路巢皮质的前部巨细胞核外侧部LMAN的
学位
铁路工程施工日志是铁路建设工程整个施工阶段的施工组织管理、施工技术等有关施工活动和现场情况变化的综合性记录。本文描述了解决构建全国应用的施工日志系统所面临的性能问题,从分析业务特征、预测性能问题规模、解决方案思路到验证方案、解决问题的全过程。
期刊