目的牙周炎是发生于牙周支持组织的一种慢性感染性疾病,牙周支持组织的炎症及破坏是其主要临床特征。牙周膜干细胞（Periodontal ligament stem cells,PDLSCs）具有形成牙周膜/牙骨质样结构、促进牙周组织再生的潜能。但牙周炎患者的PDLSCs处于炎症微环境下,其再生能力受到破坏,因此需要寻找新的方法减轻炎症、恢复其治疗潜力。牙龈间充质干细胞（Gingival mesenchymal stem cells,GMSCs）参与调控巨噬细胞极化,具有优秀的抗炎及免疫调节效力。牙龈间充质干细胞来源的外泌体（Gingival mesenchymal stem cells-derived exosomes,GMSC-Exo）不仅具有与GMSCs相似的抗炎及免疫调节作用,而且能够规避细胞疗法带来的弊端。另外,大量研究表明NF-κB信号通路与Wnt5a参与牙周组织的发育和相关疾病发展,二者之间的交叉调控对炎症反应的进程具有重要意义,我们推测GMSC-Exo可能通过调控NF-κB信号通路与Wnt5a参与PDLSCs的炎症反应。因此本研究通过探讨GMSCs-Exo对炎症微环境中PDLSCs炎症反应的影响及其潜在机制,提出一种新的有潜力的牙周炎治疗方案。方法离体牙的牙周膜组织和牙龈结缔组织经组织块法联合酶消化法处理后,分离培养得到PDLSCs和GMSCs并进行干细胞鉴定。GMSCs的培养上清液经超速离心法处理后,分离得到GMSC-Exo进行外泌体鉴定。采用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）构建体外炎症微环境。CCK-8法检测不同浓度的LPS对PDLSCs增殖的影响,并据此确定实验所需LPS浓度。实验分组:对照组,GMSC-Exo组,LPS（10μg/m L）组,LPS（10μg/m L）+GMSC-Exo（30μg/m L）。CCK-8法检测第1,2,3,4天PDLSCs的增殖能力;酶联免疫吸附试验（ELISA）比较PDLSCs上清液中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factorα,TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）的浓度;荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测PDLSCs内TNF-α、IL-1β、IL-10、p65和Wnt5a的mRNA的表达水平;蛋白免疫印记实验（Western Blot,WB）检测PDLSCs内p65,P-p65和Wnt5a的蛋白表达水平。结果成功分离获得PDLSCs和GMSCs,所得细胞均具有克隆形成能力以及向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能,且高表达间充质干细胞表面标志物CD73、CD90和CD105,而几乎不表达CD45。从GMSCs培养上清液中所得的GMSC-Exo呈外泌体典型的杯状形态,粒径在100nm左右,并阳性表达外泌体标志蛋白ALIX、TSG101、CD9和CD81。CCK-8结果显示,LPS能够促进PDLSCs增殖,随LPS浓度的升高其促进作用也更明显,但100μg/m L的LPS促进增殖的效果有所减弱（P＜0.05）。选用10μg/m L的LPS模拟炎症微环境,GMSC-Exo无论在正常条件下还是炎症微环境中对PDLSCs细胞增殖能力无明显影响（P＞0.05）。与对照组相比,GMSC-Exo组ELISA结果示上清液中促炎因子TNF-α、IL-1β的表达降低（P＜0.05）、抗炎因子IL-10无明显变化,但qRT-PCR结果则表明TNF-α、IL-1β和IL-10的mRNA的表达无显著变化。与之相比,LPS组ELISA结果示:上清液中促炎因子TNF-α、IL-1β的表达显著上调、而抗炎因子IL-10的表达被下调（P＜0.05）,qRT-PCR结果与之相似:TNF-α、IL-1β的mRNA表达明显上调、IL-10mRNA表达显著下调（P＜0.05）。与LPS组相比,LPS+GMSC-Exo组ELISA和qRT-PCR结果均显示促炎因子TNF-α、IL-1β的表达明显降低、抗炎因子IL-10表达显著升高（P＜0.05）。与对照组相比,LPS组p65和Wnt5a的mRNA表达明显升高,P-p65/p65和Wnt5a的蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与LPS组相比,LPS+GMSC-Exo组p65和Wnt5a mRNA表达明显降低,P-p65/p65和Wnt5a的蛋白表达显著升高（P＜0.05）。此外,与对照组相比,GMSC-Exo组Wnt5a的mRNA和蛋白表达均升高（P＜0.05）。结论GMSC-Exo能够减轻炎症微环境中PDLSCs的炎症反应,该抗炎作用是通过调控NF-κB信号通路与Wnt5a的表达实现的。