目的:肺癌是目前影响人类健康的主要癌症之一,非小细胞肺癌则是肺癌的主要类型。肺癌死亡率一直居高不下,开发新型抗肺癌药物迫在眉睫。本研究探讨一种新型双芳基脲类化合物(化学名称:(E)-1-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-3-(4-(4-(吗啉-1-基)-6-苯乙烯基-1,3,5-三嗪基-2-氨基)苯基)脲,代号N69B),选择非小细胞肺癌A549和H460细胞系,通过体外方法研究其抗肿瘤增殖及迁移效应,并探讨其可能的作用机制。方法:1.选择A549和H460 2种非小细胞肺癌细胞系,在不同浓度的N69B作用下,采用CCK-8法测定细胞增殖率;采用PI染色法通过流式细胞仪测定A549细胞周期变化;采用Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用Annexin V/PI双染法通过流式细胞仪测定A549细胞凋亡率的变化;采用Western Blot法测定天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3,8,9活性产物(Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-8,Cleaved caspase-9)的相对表达量。2.选择A549细胞,在不同浓度的N69B作用下,采用MTT法细胞粘附实验和FDA活细胞荧光染色法测定细胞粘附率的变化;采用划痕实验测定药物对细胞迁移的影响;采用Transwell侵袭实验观察药物对细胞侵袭能力的影响;采用Western Blot法测定波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-Cadherin)和金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的相对表达量。结果:1.CCK-8实验结果显示,与DMSO对照组比较,N69B可抑制A549细胞的增殖,且存在明显的剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05或P<0.01);PI染色流式细胞仪检测结果显示,分别采用0.5、1和1.5μM的N69B作用A549细胞24h后,各药物组G2期细胞比例均显著性升高(P<0.01);Annexin V/PI双染流式细胞仪检测结果显示,各药物组细胞凋亡率均有不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);Western Blot检测结果显示,随药物浓度的升高,A549细胞内Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9表达量均逐渐升高。2.MTT法和FDA活细胞荧光染色法细胞粘附实验结果显示,药物作用24h后,与DMSO组比较,各浓度药物组的细胞粘附率均降低,差异有极显著意义(P<0.05或P<0.01);划痕实验结果显示,药物作用24h和48h后,均可抑制A549细胞的迁移速度,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系;Transwell侵袭实验结果显示,药物作用24h后,可抑制细胞迁移过膜量(P<0.01);Western Blot结果显示,药物作用后,与DMSO对照组比较,各药物浓度组细胞Vimentin表达量有明显降低,E-Cadherin表达量则明显升高,MMP-9的蛋白表达量也有一定程度的降低。结论:N69B对A549细胞的增殖具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞周期G2-M期阻滞及caspase介导的细胞凋亡有关。同时,N69B还具有抑制A549非小细胞肺癌细胞粘附、侵袭和迁移的作用,其机制可能与抑制EMT和MMP-9的表达有关。