鸡PRL、PRLR、FSHβ和ESRα基因多态性及其与早期产蛋性能关系的研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gongchp
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动物垂体前叶分泌的催乳素(prolactin,PRL)具有广泛的生物学效应。在家禽中PRL主要影响就巢性,进而影响到产蛋性能等繁殖性状。催乳素要行使功能,必须与它的受体(Prolactin Receptor,PRLR)相结合,通过受体作用于靶细胞,引起靶基因的表达,PRL基因和催乳素受体基因的突变或敲除都会引起动物的繁殖障碍;促卵泡激素(Follical Stimulate Hormone,FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素,是由a和β亚基所组成的。在同一物种中,其a亚基hCG、LH、TSH为共有,而β亚基是特异的,决定其生物学功能,二者结合时在下丘脑-垂体-性腺生殖轴中起到重要的作用;雌激素受体(estrogen receptor,ESR or ER)是一种与特异激素应答DNA元件相结合的激活转录因子,有ESRa、ESR13两种亚型,ESRa为维持正常繁殖所必需,而ESRβ为维持正常效率的排卵所必需,它们对雌性繁殖周期中卵泡的生长发育发挥作用。本研究就以鸡的繁殖相关基因(PRL、PRLR、FSHβ和ESRa)为候选基因,运用PCR-RFLP和PCR-SSCP法检测基因变异,并分析其变异与鸡早期产蛋性能的相关性。1 PRL及其受体基因多态性与产蛋性状关系经检测发现,PRL基因调控区-378~-355bp处(GenBank accession no.AB011438)的PRLpro位点存在24bp插入/缺失突变,即5’-GACAAGAAGAGACAAGACAAGGAA-3’,而且在太湖鸡中还发现了一个新的SNP位点(A-269G)。本研究的绿壳蛋鸡80%为缺失型(AA型),没有发现插入纯合子,太湖鸡只发现一个插入纯合子BB型。PRL基因内含子2区有两个HaeⅢ酶切位点(4198bp和4169bp),4198bp处可全部切开,4169bp处部分切开,共产生3种基因型,并且还发现部分个体有插入片段。与产蛋关系分析表明,绿壳蛋鸡PRL基因调控区的AA型和AB型开产日龄呈显著相关(P<0.05、),而且内含子2区36周产蛋量的AA型显著高于AB型(P<0.05),二者的开产日龄差异也达显著水平。而太湖鸡PRL基因两个位点的虽都没达到显著水平(P>0.05),但开产50%后20周产蛋量各基因型间差异都在5个蛋以上。可见催乳素在母鸡产蛋早期对产蛋性状有一定的影响,可以作为基因标记研究的重点对象,进行进一步研究。在PRLR基因的外显子3和6分别发现单核苷酸变异。PRLR3位点(外显子3)的A9026G(GenBank accession no.AY237377)突变发生在PRLR cDNA的5’-UTR区域,不改变PRLR蛋白氨基酸序列;在PRLR6位点(外显子6)的G14820A(GenBank accession no.AY237376)是一个同义突变。经研究发现PRLR基因对早期平均蛋重有一定的影响,而对其他产蛋性能(开产日龄、蛋型指数、早期产蛋量)影响均不显著(P>0.05)。2 FSHβ基因多态性与产蛋性状关系FSHβ基因5’调控区和外显子3经PCR-SSCP检测发现,两个鸡群在FSHβpro位点都有多态,太湖鸡发现6处碱基差异,分别是:G-494A,T-470A,A-464G,-450插入碱基A,A-405G,A-361G;而绿壳蛋鸡在该位点有3处突变,分别是A-464G,-450插入碱基A,A-405G,有3种基因型。在FSHβexon3位点,太湖鸡没有多态,绿壳蛋鸡有3种基因型,对其进行SNPs分析,测序发现一处碱基突变,即A2447G(GenBank accession no.AF467082),但这个突变发生在FSHβcDNA的3’非编码区,不参与FSHβ蛋白氨基酸编码。与产蛋性状关系分析发现,绿壳蛋鸡FSHβpro位点AA型和AB型36周平均产蛋量差异显著(P<0.05),外显子3的AA型和AB型开产日龄呈显著相关(P<0.05);太湖鸡在调控区的BB型开产50%后20周平均产蛋量比AA型和AB型高出6个蛋。FSHβ基因调控区可以作为分子标记辅助选择。3 ESRa基因多态性与产蛋性状关系ESRa基因5’侧翼调控区和内含子1区经PCR-SSCP检测,发现绿壳蛋鸡5例翼调控区有两种基因型,两等位基因C的频率为0.86,D的频率为0.14。测序发现CD型中存在4处碱基突变,分别是:A-34G,T-76C,T-79C,C-102T。这4处SNPs均发生在ESRa基因cDNA的5’侧翼非编码区,不参与氨基酸编码;而太湖鸡在该位点只有一种纯合基因型。另外,绿壳蛋鸡ESRa基因内含子1区发现3处SNPs,分别是:T122C,A155G,C169T。对于绿壳蛋鸡多态与产蛋性能关系分析表明,ESRa5’侧翼调控区基因的CC型和CD型36周平均产蛋量差异显著(P<0.05)。4基因间的交互作用分析基因间交互作用分析时发现,太湖鸡催乳素受体基因外显子3和外显子6有极显著的交互作用(p<0.01),产蛋量较高的合并基因型CCFF可以作为太湖鸡选育的参考;对于绿壳蛋鸡4个基因6个位点的交互作用分析表明,FSHβ的pro和exon3位点极显著相关(p<0.01),但二者对36周产蛋性能影响也不显著(p>0.05)。推测是因为有些突变会使产蛋性能下降,而有些又会促进产蛋性能的提高,所以必须利用各种分子生物学技术尽可能多的检测出影响鸡产蛋性能的基因位点和突变,为育种提供更为完整和准确的理论依据。
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