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目的糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是一种独立的、特异的糖尿病并发症,其病理改变主要是心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)和糖代谢异常。既往研究表明,在心肌纤维化的进展中,胶原的合成和沉积是导致纤维化加重最主要的原因之一。据报道,高糖可以加速胶原的生成,进而加重纤维化程度,从而引起心肌损伤。micro RNA是一类非编码小片段RNA,其可通过结合靶基因信使RNA的特定区域从而参与转录后的翻译,具有调控细胞增殖、癌变、凋亡等生物学功能。本课题将从糖尿病心肌病出发,观察心肌成纤维细胞中miR-152的表达情况,探讨其在调控心肌纤维化中的作用,为糖尿病心肌病的防治提供新的药物作用靶点。方法动物实验:将40只大鼠随机分为对照组和糖尿病组,每组各20只。糖尿病组1次性腹腔注射150mg/kg链尿佐菌素(streptozotocin,STZ),分别在注射后的3天与7天,通过大鼠尾静脉取血测血糖,如果两次血糖均高11.1mmom/L,则认为大鼠造模成功。对照组注射等量生理盐水。常规饲养12周后,麻醉后处死大鼠,解剖出大鼠心脏,取部分心肌组织多聚甲醛固定后石蜡切片,分组行HE和Masson染色,观察心肌组织和心肌纤维化程度。剩余部分心肌组织提取蛋白和RNA,分别行Western blot检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,CollagenⅠ)的表达,q PCR检测各组miR-152的表达。细胞实验:提取乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs),将心肌成纤维细胞瞬时转染miR-152mimics、miR-152空质粒以及miR-152阴性对照。同时取部分心肌成纤维细胞进行高糖培养。用q PCR检测miR-152、CollagenⅠ、α-SMA的m RNA表达,用Western blot法检测CollagenⅠ、α-SMA蛋白的表达。用MTT法检测心肌成纤维细胞的活性。结果动物实验:与对照组相比,糖尿病组中,HE和Masson染色显示心肌细胞排列杂乱,胶原明显增多,细胞体积增大,提示造模成功。同时q PCR显示糖尿病组小鼠miR-152的m RNA表达较对照组明显降低。Western blot显示α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达较对照组升高。细胞实验:q PCR和Western blot表明,高糖组心肌成纤维细胞中miR-152的m RNA较对照组降低,miR-152mimics组心肌成纤维细胞中miR-152的m RNA表达较阴性对照组和空白对照组明显升高,α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达较阴性对照组和空白对照组明显降低。MTT检测结果显示miR-152mimics组的心肌成纤维细胞增殖水平较空白对照组和阴性对照组明显降低。结论综上所述,miR-152的高表达可降低α-SMA和CollagenⅠ等相关心肌纤维化蛋白的表达,从而抑制心肌纤维化的发生。可以为预防心肌纤维化和延缓其相关疾病,如糖尿病心肌病的进展,甚至逆转其病理改变提供新的思路。