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本文主要研究了3株有益菌在工厂化大菱鲆养殖中的应用及效果评价。经过菌种的富集、分离、筛选等步骤获得所要的有益菌,采用API-系统和16S rRNA序列分析的方法对其进行了菌种鉴定;将有益菌扩大培养,采用生物膜固定化的方法应用于水循环系统中,对其净化效果进行了检测;同时还进行有益菌的生物安全性临床实验。 在虾池中取底泥作为筛选细菌的材料,通过选择性培养基的富集、分离和筛选,共得到了硝化细菌4株,分别为X1、X2、X3和X4;亚硝化细菌6株,Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6;氨氧化细菌3株,分别为A1、A2和A3。对这三类细菌进行NH4+-N和NO2--N的去除实验对比,结果发现,硝化细菌中以X3的硝化作用最强,可达31.9%,而X1、X2和X4的NO2--N去除率分别为25.1%、26.2%、19.3%;亚硝化菌中Y1的NH4+-N去除能力最强,可达77.4%,其余的Y2、Y3、Y4、Y5及Y6的去除率分别为70.2%、70.7%、70.8%、70.2%、56.1%;氨氧化细菌中A3的去除氨氮能力最强,可达25.3%,而A1、A2的氨氮去除率分别为7.37%和12.5%。 在细菌对大菱鲆生存的安全性实验中,选取孵化后25d左右的大菱鲆仔鱼作为实验材料,将X3、Y1、A3、J3、J7和J8六株菌的菌液加入到养殖大菱鲆仔鱼的玻璃缸中,使菌液浓度达到1×107CFU/mL左右,结果显示加入有益菌的实验组与对照组中鱼苗的生存情况无明显差异,证明这几株有益菌对大菱鲆无毒害作用。 将筛选好的3株有益菌X3、Y1、A3采用API系统和16S rRNA相结合的方法进行了鉴定。菌株X3为革兰氏阳性,细菌呈短杆形或近球形,在构建系统发育树中,与Rhodococcus phenolicus相似性很高,达98%,故把菌株X3确定为红球菌属(Rhodococcus sp.)。菌株Y1革兰氏染色为阴性,细菌球形,属于盐单胞菌属(Hatomonas sP.),菌株A3革兰氏染色阴性,细菌短杆形,属于亚硝化单胞菌属(解trosomonas Sp.)。 将筛选好的X3、YI、A3以及另外3株有机降解菌J3、J7和J8按照一定的比例混合,进行扩大培养,得到500L的大批量菌液,转移至挂膜容器中,再进行培养,成功获得lm3左右的菌液,达到挂膜所需要的数量。选取一种纤维滤料作为细菌载体,加入到培养好细菌的容器中,定期补充营养,适时检测温度、pH值、溶解氧的变化,保证细菌处于最适的生长条件。2一3周后得到驯化成熟的生物膜片。 将制备好的生物膜片放入大菱虾养殖的废水中,对其进行净化效果检测,结果发现氨氮浓度由初始的0.300mg/L降为0.06om留L,去除率为80%;亚硝酸氮浓度由o.ol6m叭增到0.052mg/L;硝酸氮由初始的o.36om叭增到0.39om叭;而养殖废水的COD也有很大的降解效果,由4.42m留L降到2.17m叭,降解率可达50.9%。 本实验还现场进行了单株菌X3、YI、A3对大菱鲜养殖废水的净化效果检测。其结果与实验室中筛选细菌时进行的检测效果有一定的差异,实验室中Yl的氨氮去除率可达77.4%,A3氨氮的去除率达25.3%,X3的亚硝氮的去除率达31,9%,而养殖现场本实验中这三株菌的净化效果分别为42.3%、44.1%和14.9%。