【摘 要】
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研究目的最新的数据显示,中国乃至全球范围内,结直肠癌在肿瘤性疾病中的地位始终稳固不退,甚至逐渐出现上升趋势。转移是肿瘤患者死亡的主要原因,研究表明晚期结直肠癌患者的5年生存率显著降低。综上,结直肠癌在国内乃至全球范围的形势仍不容乐观,尤其是对肿瘤转移患者的诊治问题。因此,对结直肠癌患者转移机制的研究显得尤为重要。Claudin蛋白是一种细胞间的封闭蛋白,异常表达可破坏上皮渗透屏障,使细胞极性丧失,
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研究目的最新的数据显示,中国乃至全球范围内,结直肠癌在肿瘤性疾病中的地位始终稳固不退,甚至逐渐出现上升趋势。转移是肿瘤患者死亡的主要原因,研究表明晚期结直肠癌患者的5年生存率显著降低。综上,结直肠癌在国内乃至全球范围的形势仍不容乐观,尤其是对肿瘤转移患者的诊治问题。因此,对结直肠癌患者转移机制的研究显得尤为重要。Claudin蛋白是一种细胞间的封闭蛋白,异常表达可破坏上皮渗透屏障,使细胞极性丧失,黏附力下降,导致多种肿瘤的发生及发展。本课题组前期数据已证实Claudin-11基因甲基化参与结直肠癌转移过程,因此,本研究将在前期基础上,继续深入探讨Claudin-11基因甲基化对结直肠癌转移能力的影响及其分子机制。研究方法1.通过转染过表达质粒与小干扰RNA分别上调和下调Claudin-11在结直肠癌细胞株HCT116和SW620中的表达水平,并通过q RT-PCR验证Claudin-11表达水平,明确转染效率。2.对转染后不同分组细胞进行Transwell实验,对比评估Claudin-11表达水平的改变对结直肠癌细胞迁移能力的影响。3.应用Western blot检测对比EMT相关分子标志物（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）在转染后不同分组细胞中的表达情况,验证Claudin-11影响结直肠癌转移的具体分子机制。研究结果1.分别转染过表达质粒及si RNA后,Claudin-11在结直肠癌细胞株出现差异化表现。2.Claudin-11差异化表达后,结直肠癌细胞的迁移能力改变。即:上调表达水平后,肿瘤细胞迁移能力减弱;下调后,迁移能力增强。3.Western blot实验发现:分别上调、下调Claudin在结直肠癌细胞中的表达水平,可改变部分EMT相关分子标志物的表达;即:上调Claudin-11的表达后,E-cadherin表达增多,Vimentin表达减少。反之下调Claudin-11的表达后,E-cadherin表达减少,Vimentin表达增多。研究结论Claudin-11可抑制结直肠癌细胞的迁移能力,其机制可能是通过调节一些EMT相关蛋白的表达。结合前期研究结果,我们推断出,Claudin-11基因甲基化可通过介导EMT途径参与结直肠癌的转移。
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