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目的研究miR-203a-3p转染脂肪干细胞（Adipose stem cells,ASCs）后的条件培养基（Conditioned medium,CM）对小鼠特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）模型中上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响及其机制。方法转染miR-203a-3p mimics到人脂肪干细胞（Human adipose stem cells,h ASCs）。倒置相差显微镜观察脂肪干细胞转染前后的细胞形态。ASCs在无血清培养基（Serum-free media,SFM）中孵育3 d后从培养上清中离心得到干细胞分泌组（Secretome,Sec）。4～6周龄C57BL/6J小鼠用溶于生理盐水的博莱霉素（Bleomycin,BLM）以5 mg.kg-1的剂量一次性气管内灌注制作IPF模型,对照组给予等量的生理盐水灌注。造模14 d分别用ASCs释放的分泌组（称为原始分泌组）和转染miR-203a-3p mimics的ASCs释放的分泌组（称为miR-203a-3p分泌组）经喉镜辅助下气管内灌注治疗,1次.d-1,连续7 d,并在造模21 d实施安乐死,收集肺组织。观察肺组织病理变化及评估肺纤维化相关指标。体外用5μg.L-1转化生长因子β1（Transforming growth factor beta 1,TGF-β1）刺激MLE-12细胞24 h后,分别加入原始分泌组和miR-203a-3p分泌组进行共培养36 h。MTS法检测MLE-12细胞的生长速率。通过苏木精-伊红染色、Masson三色染色评估肺组织病理学变化及胶原分布;采用实时定量PCR（Quantitative reverse transcription PCR,q RT-PCR）检测小鼠肺组织及MLE-12细胞miR-203a-3p的m RNA水平;western blot法检测IL-6、TGF-β、CollagenⅠ、E-Cadherin、Vimentin、α-SMA的蛋白表达水平和PI3K/Akt/m TOR（PAM）信号通路的磷酸化蛋白表达水平。免疫组织化学和免疫荧光染色检测肺组织和MLE-12细胞EMT标志物蛋白水平（E-Cadherin、Vimentin、α-SMA）。结果1与对照组相比,模型组小鼠肺组织发生明显的炎症浸润和胶原沉积增多,TGF-β、CollagenⅠ的蛋白水平在模型组第7 d、14 d、21 d呈时间依赖性升高,（P＜0.05）,Vimentin的蛋白水平在模型组中也显著升高并在造模14 d到达高峰（P＜0.01）,E-Cadherin蛋白水平在模型组中呈时间依赖性下降（P＜0.05）。2与对照组相比,BLM诱导21 d的小鼠肺组织和TGF-β1刺激24 h的MLE-12细胞中miR-203a-3p的m RNA水平降低（P＜0.05）。3与对照组相比,miR-203a-3p mimics转染ASCs 48 h后miR-203a-3p的m RNA水平升高（P＜0.01）,且高于转染24 h、36 h后miR-203a-3p的m RNA水平;倒置相差显微镜下观察转染miR-203a-3p后的ASCs的细胞形态无改变;与模型组小鼠相比,干细胞分泌组治疗后肺组织炎性浸润减少,胶原沉积减少,TGF-β、CollagenⅠ、Vimentin水平降低（P＜0.05）,E-Cadherin水平升高（P＜0.01）;与Sec组（即原始分泌组治疗组）相比,t-Sec组（即miR-203a-3p分泌组治疗组）的TGF-β、CollagenⅠ和Vimentin水平降低（P＜0.05）,E-Cadherin水平升高（P＞0.05）;免疫组织化学染色显示,与21 d模型组小鼠相比,干细胞分泌组治疗后小鼠肺组织E-Cadherin蛋白棕染增加、α-SMA蛋白棕染减少;与Sec组相比,t-Sec组小鼠肺组织E-Cadherin蛋白棕染增加,α-SMA蛋白棕染减少。4与对照组相比,干细胞分泌组促进了MLE-12细胞的增殖;与TGF-β1诱导组相比,干细胞分泌组处理后细胞内IL-6、TGF-β、CollagenⅠ、Vimentin、α-SMA蛋白水平降低（P＜0.05）,E-Cadherin蛋白水平升高（P＜0.01）;与Sec组相比,t-Sec组IL-6、TGF-β、Vimentin蛋白水平降低（P＜0.05）,E-Cadherin蛋白水平升高（P＜0.05）。5与对照组相比,IPF小鼠模型肺组织和TGF-β1诱导MLE-12细胞中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR蛋白水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,干细胞分泌组治疗后肺组织和细胞中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR蛋白水平降低（P＜0.05）。结论1干细胞分泌组具有抑制特发性肺纤维化小鼠肺纤维化程度和上皮间质转化的特性。2将miR-203a-3p转染到ASCs中,可以增加干细胞分泌组抗小鼠特发性肺纤维化及抑制上皮间质转化的能力。3 Mi R-203a-3p转染ASCs后条件培养基可能通过降低PI3K/Akt/m TOR信号通路活性抑制小鼠肺上皮间质转化及纤维化程度。图18幅;表5个;参197篇。