【摘 要】
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目的:通过体外、体内实验考察黄杞苷对HUVEC氧糖剥夺/复氧（Oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）和大鼠脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后的保护作用,并初步探讨其促血管新生的分子机制,为黄杞苷的应用开发提供理论依据。方法:体外实验:①CCK-8法检测细胞增殖;②利用流式细胞仪,检测细胞周期水平;③利用Tr
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目的:通过体外、体内实验考察黄杞苷对HUVEC氧糖剥夺/复氧（Oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）和大鼠脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后的保护作用,并初步探讨其促血管新生的分子机制,为黄杞苷的应用开发提供理论依据。方法:体外实验:①CCK-8法检测细胞增殖;②利用流式细胞仪,检测细胞周期水平;③利用Transwell和划痕实验,检测黄杞苷对细胞迁移能力的影响;④利用成管实验,检测黄杞苷对HUVEC管腔形成能力的影响;⑤应用Western Blot 技术,检测 VEGF、Vash-1、Vash-2 和 Ang-1、Ang-2、p-Tie2 表达水平;⑥加入VEGFR抑制剂Axitinib,检测上述蛋白水平的变化。体内实验:①利用线栓法制备大鼠中动脉栓塞阻塞（MCAO）脑缺血再灌注损伤模型;②用改良神经功能缺损评分（mNSS）评定大鼠神经功能;③监测造模后和黄杞苷给药后大鼠的脑血流量;④利用免疫组织化学对VEGF、NeuN、CD31的表达进行分析。结果:①HUVEC经过OGD/R处理后细胞活性明显下降,黄杞苷在200nM和400 nM浓度下孵育能明显提高细胞活力,促进细胞增殖,对细胞具有一定的保护作用;②流式结果显示,黄杞苷（50～400nM）浓度显著增加G2/M期细胞数量,表明黄杞苷能够促进细胞增殖;③Transwell实验结果显示,黄杞苷（50～400 nM）干预后,黄杞苷剂量依赖性增加迁移至下室的细胞数量。划痕实验结果显示,黄杞苷（50～400 nM）促进HUVEC的迁移能力,细胞迁移率增加;④与对照组相比,黄杞苷（50～400 nM）显著增加HUVEC的成管数量和成管面积;⑤OGD/R诱导的HUVEC损伤和大鼠脑缺血再灌注损伤（I/R）模型中,黄杞苷显著增加VEGF、Vash-2、Ang-1和p-Tie2蛋白的表达,抑制Vash-1和Ang-2蛋白的表达;⑥加入Axitinib与黄杞苷联用,可逆转Vash-1的升高和Vash-2的降低,但Axitinib对Ang-1/Tie-2信号通路无明显影响;⑦黄杞苷（20 mg/kg）可显著降低脑缺血再灌注大鼠的脑缺血面积、脑含水量、神经功能评分,显著增加大鼠脑血流量;⑧免疫组织化学染色结果显示,黄杞苷（20 mg/kg）显著增加VEGF和CD31的表达,NeuN染色结果显示,黄杞苷对脑缺血再灌注后大鼠的神经元具有保护作用。结论:黄杞苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其机制可能是通过激活VEGF/Vasohibin和Ang-1/Tie-2信号通路,促进血管新生,提高血管稳定性。
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