重组人p53腺病毒转染胰腺癌细胞Aspc-1增加辐射敏感性的研究

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目的:研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)注射液对胰腺癌Aspc-1细胞辐射敏感性的影响及其相关机制,探讨p53通路相关基因p53、p21、bax在胰腺癌细胞中的表达关系。方法:以体外培养的人胰腺癌Aspc-1细胞作为研究对象。实验分为对照组(C组)、照射组(R组)、转染组(D组)、转染照射组(D+R组),应用细胞克隆形成试验检测重组人p53腺病毒注射液对Aspc-1细胞辐射增敏作用,观察各组细胞存活情况并绘制细胞存活曲线,利用单击多靶数学模型和线性平方模型拟合辐射剂量效应曲线;应用流式细胞仪技术分析各组细胞经4Gy照射后48h细胞周期分布和细胞凋亡指数变化;应用细胞免疫化学检测p53不同转染时间(24h,48h,72h)后p53及其相关基因p21、bax在胰腺癌Aspc-1细胞中的表达。结果:1.克隆形成试验结果显示:转染重组人腺病毒p53并给予不同剂量照射后的集落形成能力明显下降,随着剂量的增加,下降更为明显;在同一照射剂量下,D+R组细胞的集落形成能力最低;Aspc-1细胞照射组(R组)的平均致死剂量D0为2.417,转染照射组(D+R组)的D0为2.028,准阈剂量(Dq)分别为1.205、1.024,两组的放射增敏比SERD0(D0之比)为1.192,SERD(Dq之比)为1.175。2.细胞周期结果显示:胰腺癌细胞Aspc-1转染重组人p53腺病毒后,G2/M期细胞比例增加,与其他三组比较,转染照射组(D+R)组G2/M期阻滞更加明显(P<0.05);细胞凋亡检测结果显示与其他三组比较,转染照射组(D+R)组的凋亡率更高(P<0.05);G2/M期细胞与凋亡指数相关分析:rs=0.917,(P<0.001),二者之间存在正相关关系。3.细胞免疫化学检测结果:转染组(D组)显示Bax、P21、P53的蛋白表达比对照组(C组)蛋白表达高,p53不同转染时间状态下各组的蛋白表达水平不同,转染72小时后表达明显。结论重组人p53腺病毒能够转染胰腺癌细胞株Aspc-1细胞,并产生明显的辐射增敏生物学效应。其机理可能与细胞周期阻滞、Bax、P21表达增加相关。
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