缺血性卒中后内皮祖细胞神经保护的基础及临床研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lsy5
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目的:骨髓衍生干细胞迁移、归巢至脑组织内可以参与缺血性脑组织损伤的修复过程,这个过程受到SDF-1/CXCR4信号轴的调节;淫羊藿苷对缺血性脑损伤有一定的保护作用,且对于HSCs迁移至外周并归巢至受损组织具有一定的调节作用。由此我们推测,在缺血性脑损伤中,淫羊藿苷增强骨髓衍生干细胞动员和迁移,并通过SDF-1α/CXCR4趋化因子轴归巢至受损脑组织,从而减小脑卒中梗死体积和改善神经功能缺损。方法:线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,分为三组:假手术组(sham group),MCAO模型淫羊藿苷治疗组(ICA group)和MCAO模型生理盐水对照组(vehicle group)。淫羊藿苷腹腔注射治疗,以生理盐水作为对照,治疗后3天,7天,14天三个时间点,使用18分制神经功能障碍评分评价神经功能缺损,使用TTC染色测量梗死体积,并检测脑含水量;使用RT-PCR和Western Blot分别在转录和蛋白表达水平检测脑组织SDF-1α和CXCR-4的表达水平;流式细胞仪定量检测外周血和骨髓中骨髓衍生干细胞。结果:淫羊藿苷治疗3天神经功能评分为5.4±0.3分,7天为7.3±0.5分,14天为11.2±0.7分;对照组生理盐水治疗3天神经功能评分为3.2±0.6分,7天神经功能评分5.5±0.6分,14天为6.9±0.4分。两组各个阶段动物模型的神经功能缺损差异存在显著性(P<0.05)。图像定量分析显示,盐水治疗组的第3天梗死体积为(47.43 ±2.3)%2,7天为(58.62±3.52)%,14天为(33.67±3.18)%;淫羊藿苷治疗组的第3天梗死体积为(38.98±1.62)%,7天为(46.12±2.46)%,14天(23.55±2.65)%。在各个时间点,淫羊藿苷治疗组的TTC染色后梗死体积较生理盐水对照组减小,差异具有统计学显著性(P<0.05)。生理盐水治疗对照组的第3天脑含水量(84.1±1.4)%,7天为(84.7±1.6)%,14天为(81.9±1.3)%;淫羊藿苷治疗组的第3天脑含水量(83.2±1.2)%,7天为(81.1±1.5)%,14天为(79.0±1.4)%。两组脑含水量都高于假手术组,淫羊藿苷治疗组的脑含水量较生理盐水对照组在第7天和14天降低,差异具有统计学显著性(P<0.05),而在第3天两组间脑含水量之间并未发现显著性的统计学差异(P>0.05)。外周循环中骨髓衍生干细胞显著增多(P<0.05);骨髓中CD45+/CD34+和 CD45+/CD34+/c-kit+干细胞数量增多(P<0.05),CD45+/CD34+/CD31+细胞数量轻度升高,但无统计学差异(P>0.05);生理盐水治疗对照组的第3天脑含水量(84.1±1.4)%,7 天为(84.7±1.6)%,14 天为(81.9 ±1.3)%;淫羊藿苷治疗组的第 3天脑含水量(83.2±1.2)%,7天为(81.1±1.5)%,14天为(79.0±1.4)%。两组脑含水量都高于假手术组,淫羊藿苷治疗组的脑含水量较生理盐水对照组在第7天和14天降低,差异具有统计学显著性(P<0.05),而在第3天两组间脑含水量之间并未发现显著性的统计学差异(P>0.05)。淫羊藿苷治疗组在第3天,7天和14天的SDF-1α和CXCR4蛋白表达水平都高于盐水治疗组,其中SDF-1α蛋白表达水平分别是生理盐水对照组的1.96,1.86和1.69倍,CXCR4蛋白表达水平分别是生理盐水对照组的3.28,2.15和2.38倍。各个时间点两组间的SDF-1α和CXCR4蛋白表达水平比较,差异都具有统计学显著性(all P<0.05)。结论:淫羊藿苷在缺血性脑损伤中具有一定神经保护作用,通过增强SDF-1α/CXCR4趋化因子轴功能,诱导骨髓中BMCs动员并迁移至外周循环中并归巢至受损脑组织进行组织修复是其可能的作用机制之一。目的:内皮祖细胞在缺血性卒中后的血管修复及神经保护中发挥着重要的作用,探讨急性缺血性卒中后内皮祖细胞的水平,以及其与梗死严重性、预后之间的关系有助于进一步了解急性卒中后内皮祖细胞的作用,为缺血性卒中急性期治疗提供新的靶点和思路。方法:按照入选排除标准连续入组2014年3月-2015年5月我院神经内科大动脉粥样硬化型卒中或腔隙性脑梗死、病程≤72小时前循环急性缺血性卒中患者81例,其中大动脉粥样硬化患者45例,腔隙性脑梗死患者36例;采用MRI弥散加权序列(DWI)计算梗死体积;采用流式细胞仪法测定患者外周静脉血CD34+/CD133+细胞水平;比较大动脉粥样硬化性卒中和腔隙性脑梗死组CD34+/CD133+细胞水平,同时检验大动脉粥样硬化组45例患者CD34+/CD133+细胞水平与梗死体积、基线NIHSS评分以及与3个月mRS间的相关性。结果:(1)急性腔梗组周围循环中CD34+/CD133+细胞比例高于大动脉粥样硬化型非腔梗组周围循环中,存在显著的统计学差异(P<0.01);(2)大动脉粥样硬化性卒中患者预后不良组周围循环CD34+/CD133+细胞比例(%)与预后良好组比较差异无显著性(P=0.204);(3)Logistic回归分析显示,CD34+/CD133+细胞比例(%)与预后无统计学上相关(P=0.179);而梗死体积与预后相关(P=0.003);基线NIHSS评分也与预后相关(P<0.01);总胆固醇水平与预后也存在统计学上相关(P=0.048);冠心病病史与预后存在相关(P=0.039);(4)Spearman双变量相关性分析显示,梗死体积与周围循环中CD34+/CD133+细胞比例(%)在统计学上显著相关(r=-0.360;P=0.003);年龄与周围循环中CD34+/CD133+细胞比例(%)存在统计学上相关(r=-0.357,P=0.016);基线NIHSS与周围循环中CD34+/CD133+细胞比例(%)在统计学上无相关性(r=-0.249,P=0.099)。结论:(1)和腔隙性梗死患者相比,大动脉粥样硬化性卒中患者急性期外周循环中CD34+/CD1133+细胞比例更低;(2)大动脉粥样硬化性卒中患者CD34+/CD133+细胞比例与梗死体积呈负相关;(3)大动脉粥样硬化性卒中患者预后与外周CD34+/CD133+细胞比例无相关性,预后与梗死体积及基线NIHSS评分相关。
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