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目的探讨柿树寄生水提取物(Water Extracts of Persimmon Parasitism)对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法(一)将肝癌H22细胞按常规方法复苏后,依据细胞培养方法进行培养,而后接种到小鼠体内进行体内传代。(二)建立腹水瘤模型实验:取雄性昆明小鼠60只,随机分为6组,空白组、模型组、阳性对照CTX组、WEPP低剂量(WEPPL)组、WEPP中剂量(WEPPM)组、WEPP高剂量(WEPPH)组,除空白组外,其余五组小鼠腹腔内注射肝癌H22细胞,每只0.2ml,于24h后进行给药治疗,除空白组和模型组均给予生理盐水灌胃,CTX组给予注射用环磷酰胺溶液0.02g/kg腹腔注射,WEPPL组给予相当于生药量10g/kg、WEPPM组20g/kg、WEPPH组40g/kg分别灌胃,每日1次,连续给药7天。7天后暂停给药,每日称量动物体重,观察记录各组动物毛色、进食、活动及死亡情况,记录小鼠死亡时间。计算每组小鼠的平均生存时间,分析WEPP对小鼠体重的影响。(三)建立实体瘤模型实验:取雄性昆明小鼠90只,随机分成9组,空白组、模型组、阳性对照CTX组、WEPPL组、WEPPM组、WEPPH组、CTX+WEPPL组、CTX+WEPPM组、CTX+WEPPH组。除空白组外,其余组取右侧上臂腋下,皮下注射肝癌H22细胞,每只0.2ml,于24小时后开始,按照腹水瘤模型的给药方法连续治疗10天,第11天称量体重、眼球采血、处死小鼠后取肝脏、胸腺、脾脏组织、剥离瘤块,测量如下指标:1.计算抑瘤率、q值、胸腺指数、脾脏指数,评价抗肿瘤作用,联合用药情况,对免疫器官的影响。2.测小鼠血中红细胞、白细胞、血小板含量,血清ALT、AST、血清肌酐和尿素氮的水平,评价药物对血液系统、肝肾功能的影响。3.采用试剂盒测定肝脏组织中MDA含量以及SOD、GSH的活性。4.采用ELISA方法检测肿瘤组织VEGF、TNF-α含量。5.HE染色观察肿瘤组织病理切片;采用免疫组化法,测定肿瘤组织中Bcl-2、Bax、p53、Fas、Fasl的表达。结果(一)腹水瘤模型实验:与模型组相比,各治疗组平均生存时间显著提高,其中CTX组、WEPPM、WEPPH组(P<0.01),WEPPL组(P<0.05);与模型组相比,各给药组0、3、7天的体重均无显著性差异(P>0.05),第8~10天,CTX组、WEPPM、WEPPH组的体重比模型组显著降低(P<0.01或者P<0.05)。(二)实体瘤模型实验:1.与模型组相比,CTX组、WEPPH组、联合用药各剂量组体重显著降低(P<0.05、P<0.01、P<0.01);WEPPL组和CTX组、WEPPM组、WEPPH组、联合用药各剂量组的肿瘤重量显著降低(P<0.05或者P<0.01);CTX组、WEPPH、联合用药各剂量组的胸腺指数极显著降低(P<0.01);CTX组、CTX+WEPPH组的脾脏指数显著降低(P<0.05);CTX组、WEPPL组、WEPPM组、WEPPH组、CTX联合WEPP低、中、高剂量组的抑瘤率分别为49.49%、15.07%、40.97%、39.16%、67.65%、68.13%、63.96%,q值分别为1.18、0.97、0.92,联合用药有药效相加作用。2.与模型组相比,CTX组、WEPPH、联合用药各组的WBC极显著降低(P<0.01);CTX+WEPPM、CTX+WEPPH红细胞显著升高(P<0.05);CTX+WEPPM、CTX+WEPPH的血小板显著升高(P<0.05),其余各组无显著变化(P>0.05);CTX组的ALT显著降低(P<0.05),WEPPH、CTX+WEPPH的ALT显著升高(P<0.01、P<0.05),其余各组无显著变化(P>0.05);CTX的AST显著降低(P<0.05),WEPP单药各剂量组AST极显著升高(P<0.01);各治疗组的Scr值与模型组比较,无显著性差异(P>0.05);CTX组、联合用药各剂量组的BUN显著降低(P<0.05或者P<0.01)。3.与模型组比较,CTX组、WEPPH组、CTX+WEPPH组的MDA含量极显著下降(P<0.01);WEPPM、CTX+WEPPL、CTX+WEPPM组的MDA含量显著下降(P<0.05);CTX组、WEPPH组、CTX联合WEPP中、高剂量组均能显著提高SOD的活性(P<0.05);CTX组、WEPPM、WEPPH组、CTX联合WEPP各治疗组均能极显著提高GSH的活性(P<0.01)。4.与模型组相比,CTX组、WEPPM、CTX+WEPPM组的VEGF极显著下降(P<0.01);WEPPH组、CTX+WEPPL、CTX+WEPPH组的VEGF显著下降(P<0.05);CTX组、WEPPM、CTX+WEPPM组肿瘤组织中TNF-α的含量显著或极显著下降(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。5.HE染色显示,CTX、WEPP各治疗组肿瘤细胞数量减少、细胞破碎、坏死、有堆积现象,坏死区域明显增加、凋亡细胞百分比均有不同程度增加;从免疫组化方法结果上看,CTX组与模型组相比极显著下调Fas、Fasl阳性表达(P<0.01),WEPPM组则显著上调Bax、Fas、p53的阳性表达(P<0.01、P<0.01、P<0.05),同时显著下调Bcl-2的阳性表达(P<0.05)。结论WEPP具有抗肝癌H22细胞作用,可以通过提高荷瘤小鼠的生存时间、提高抑瘤率、提高生存质量达到抗肿瘤作用。WEPP与CTX联合治疗可以增加抑瘤作用,WEPP对免疫器官、骨髓抑制作用不显著,不影响肾功能,有一定的肝损伤。WEPP抗肿瘤作用机制可能与抗氧化应激、抗血管生成、抗炎症因子、细胞凋亡等作用相关。