莱茵衣藻是一种三套基因组都能进行遗传转化的模式生物,在分子生物学等领域有着巨大的发展空间。CRP蛋白作为医学疾病检测和食疗疗效监测领域的重要指标,开发外源表达CRP蛋白途径对研制快速检测CRP试纸、试剂具有重要意义。本研究构建了三种不同的表达载体,分析比较不同的构建方式对外源蛋白在莱茵衣藻细胞核转化中的转化率及表达量的影响,为人C-反应蛋白异源表达提供了新思路和理论基础。（1）莱茵衣藻真核表达载体p SP108-CRP的构建与表达。首先通过合成CRP基因,构建表达载体p SP108-CRP。然后,探究得到莱茵衣藻细胞核转化线性p SP108-CRP质粒的最优条件为:Bg IⅡ单酶切制备的线性p SP108-CRP质粒,最佳受体衣藻用量为2m L,最佳p SP108-CRP质粒用量为6μg,最佳涡旋振荡时间为20s。通过PCR、RT-PCR对阳性藻株进行检测,得到片段大小正确的ble和CRP基因,说明ble基因和CRP基因已经成功整合并在转录水平上表达。最后,经p SP108-CRP质粒转化共获得5株阳性衣藻,通过SDS-PAGE、Western blot检测证实CRP蛋白已经在莱茵衣藻中成功表达。（2）莱茵衣藻真核表达载体p SP108-CRP-gfp的构建与表达。首先合成gfp基因,构建表达载体p SP108-CRP-gfp。然后,探究得到莱茵衣藻细胞核转化线性p SP108-CRP-gfp质粒的最佳条件为:Eco R V单酶切制备的线性p SP108-CRP-gfp质粒转化效果最好,最佳受体衣藻用量为2m L,最佳线性p SP108-CRP-gfp质粒用量为6μg,最佳涡旋振荡时间为20s。最后,通过PCR、RT-PCR检测得出:ble基因和CRP基因成功整合并在转录水平表达,而gfp基因在转录水平上可能出现了转基因沉默。经p SP108-CRP-gfp质粒转化共获得的3株阳性衣藻,采用SDS-PAGE蛋白电泳未检测到CRP蛋白,CRP蛋白可能未表达或表达量极低。这种载体构建方式可能由于外源基因片段过长转录、翻译过程受阻,不利于外源蛋白的表达。（3）莱茵衣藻真核表达载体p SP-ble-CRP-fusion的构建与表达。首先以p SP08-CRP质粒中ble基因和CRP基因为基础,通过重叠PCR合成表达融合蛋白的ble-CRP-fusion基因,成功构建表达载体p SP-ble-CRP-fusion。然后,探究得出莱茵衣藻细胞核转化线性p SP-ble-CRP-fusion质粒的最优条件为:最佳受体衣藻用量为4m L,最佳线性p SP-ble-CRP-fusion质粒用量为6μg,最佳涡旋振荡时间为20s。最后,通过PCR、RT-PCR检测得到:有2株转化子的ble基因和CRP基因均成功在转录水平上表达。但是通过SDS-PAGE蛋白电泳未检测到融合蛋白,可能由于ble-CRP融合蛋白表达量极低或融合蛋白在翻译过程受阻,不利于蛋白质表达。这种采用基因无缝连接表达融合蛋白的方式构建的表达载体转化效率及表达量都很低,可能不利于外源蛋白在衣藻中表达。