河南省部分地区规模化奶牛场BVDV流行病学调查及分子生物学分析

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牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea/Mucosal disease,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea Virus,BVDV)引起的具有多种临床症状的传染病。该病不仅致病机制复杂,而且缺乏有效治疗手段。牛病毒性腹泻会对繁殖性能、产奶量等产生直接影响,对感染的牛群造成重大的经济影响,因牛病毒性腹泻病毒产生的重大经济影响促使世界上许多国家开始实施区域或国家根除BVD计划。在国内,BVDV感染快速上升,这也意味着未来或有更多牛群感染,而病毒基因亚型的增加则意味着防控难度增大。本研究通过对河南省奶牛场进行牛病毒性腹泻病毒的流行病学调查和分析,得出主要研究结果如下:1.通过对河南省部分地区规模化奶牛场进行采样,使用酶联免疫吸附试验方法对采集的5486份血清样品进行BVDV抗原检测,并对不同奶牛场的区域位置、规模、地理位置、奶牛年龄进行分析。结果表明,平均抗原阳性率为1.77%(97/5486),场阳性率为87.5%(35/40)。其中A10奶牛场BVDV的阳性率最高为7.8%(11/141),在A11、A17奶牛场中,BVDV的阳性率最低为0.66%(1/151)。在不同年龄分组中,后备牛中BVDV的阳性率最高为2.31%(21/910),犊牛的阳性率最低为1.12%(6/537)。在不同区域分组中,在驻马店地区,BVDV抗原阳性率最高为6.18%(18/291);在鹤壁地区,BVDV抗原阳性率最低为0%(0/102)。在不同规模奶牛场分组中,在养殖规模≥1000头牧场中,BVDV抗原阳性率为2.78%(41/1472),在养殖规模<1000头牧场中,BVDV抗原阳性率为1.39%(56/4014)。在不同地理位置分组中,豫南位置的奶牛场BVDV阳性率最高为3.49%(27/774),豫东位置的奶牛场BVDV阳性率最低为1.16%(10/865)。2.根据BVDV抗原检测结果,将96份抗原阳性样品构建5’-UTR、Npro基因引物来进行分子生物学分析。结果表明,根据5’-UTR序列进行引物扩增,可扩增出200 bp左右的特异性条带;10株代表性测序株之间的同源相似性为76.0%~100%,参考株之间的同源相似性为69.0%~100%,10株代表性的测序株有BVDV-1d、1o、1m、1q四种基因亚型。根据Npro基因进行引物扩增,可扩增出大小为429 bp的特异性条带;5株代表性测序株之间的同源相似性为65.4%~100%,参考株之间的同源相似性为61.9%~90.2%,5株代表性的测序株分别有BVDV-1o、1m、1q三种基因亚型。3.将40家奶牛场的牛奶样品进行蛋白率、乳脂率、体细胞数、日产奶量的测定并进行统计,分析感染BVDV对奶牛的生产性能产生的影响以及BVDV在不同胎次、日产奶量、乳脂率、蛋白率、体细胞数间的差异性。结果表明,1胎次BVDV阳性牛在5-25 kg阶段中日产奶量显著增高,2胎次BVDV阳性牛在25-40 kg阶段中日产奶量显著降低,3胎次BVDV阳性牛在5-25 kg阶段中日产奶量显著降低;2胎次BVDV阳性牛在≥3%阶段中蛋白率显著升高,4胎次BVDV阳性牛在2-3%阶段中蛋白率显著降低。在不同胎次间,BVDV血清阳性率有显著差异性(P<0.05)。
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