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对周围组织的侵袭以及远端器官的转移是恶性肿瘤细胞的重要特性，这两个过程都需要一些蛋白水解酶的参与，这其中，Ⅳ型胶原酶(包括MMP-2和MMP-9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。所以我们应用胞内抗体技术，探讨通过胞内抗体与Ⅳ型胶原酶结合，阻断Ⅳ型胶原酶向细胞表面的分泌，达到对恶性肿瘤细胞侵袭转移抑制的效果。胞内抗体技术是指应用基因重组技术在非淋巴细胞内表达具有生物活性的抗体，从而特异性干扰或阻断某些生物大分子的活性或加工、分泌过程，引起细胞的一系列生物过程发生改变。 在本研究中，我们构建了内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶单链抗体基因真核表达载体PcDNA3.1.ER.scFv，对有着MMP-2和MMP-9高水平表达和活性的人纤维肉瘤HT-1080细胞系和人高转移性巨细胞肺癌PG细胞系进行瞬时和稳定基因转染，Western blot检测，ER.scFv胞内抗体能够在HT-1080、PG细胞内表达；异种移植实验免疫组化分析得出ER.ScFv在HT-1080细胞内定位性表达；ER.scFv胞内抗体在胞内与靶蛋白MMP-9的结合特异性在免疫沉淀实验中又得到了进一步的证实。用明胶酶谱检测ER.scFv对HT-1080、PG细胞Ⅳ型胶原酶的分泌和活性的影响，结果显示同野生型与PcDNA3.1空白质粒组比较，ER.scFv对MMP-9有明显的抑制作用，对MMP-2有轻度的抑制作用。在同时进行的反明胶酶谱检测中，ER.scFv胞内抗体对TIMP-1、TIMP-2的分泌无影响。随后，我们对肿瘤细胞与侵袭转移有关的多组体外指标进行了研究，ER.scFv胞内抗体对HT-1080、PG细胞体外Matrigel侵袭有高度的抑制作用，抑制率分别为61.8％和76.3％，而对两种细胞的运动移动没有影响。在体外增殖实验中，稳定表达ER.scFv的HT-1080、PG细胞在普通培养板的生长无明显改变，而在Matrigel的增殖却有明显的抑制。同野生型与PcDNA3.1空白质粒组比较，稳定表达ER.scFv的HT-1080／V细胞对基质的粘附没有明显改变，对同种及内皮细胞的粘附却有明