呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条的研制

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硝基呋喃类药物是一类人工合成的抗生素,因价格低廉,被广泛用于水产品的病害防治。硝基呋喃类药物半衰期很短,在动物体内代谢迅速,且其代谢物可在机体内稳定存在。硝基呋喃类药物的残留严重威胁到人体的健康,因此,世界各国均把硝基呋喃类药物列为禁用渔药。目前,用于检测硝基呋喃类代谢物的常用方法为LC-MS/MS,但这种方法需要昂贵的仪器,且前处理复杂,成本高、分析时间又长,不利于现场分析。而免疫层析分析法具有省时、高效、成本低等优点,而且检测结果重现性好,非常适用于现场检测和大批量筛查。本研究旨在研制出呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条,初步建立呋喃唑酮代谢物残留的免疫层析快速检测方法,为商用化试纸条的开发提供方法依据。首先实验对制备胶体金的方法进行了优化,采用三种还原方法来制备胶体金,对比制备的胶体金性能参数,选择最优的还原方法。实验选择柠檬酸三钠还原制备胶体金,制备的胶体金粒径为18nm左右。利用上述方法制备的胶体金来标记AOZ单克隆抗体,制备金标探针,再将AOZ人工合成抗原(CPAOZ-BSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分别包被在硝酸纤维素膜的T线和C线处,组装成胶体金免疫层析试纸条。单抗的最佳标记量为7.8μg/mL,单抗标记最佳的pH为9.0,抗原的最佳包被浓度为1.0mg/mL,二抗的最佳包被浓度为1.0mg/mL,金标抗体的最佳稀释倍数为2倍稀释,胶体金免疫层析试纸条的目测检测限为80ng/mL。试验研究了几种硝基呋喃类代谢物(AOZ)的结构类似物对试纸条的特异性,实验结果显示:试纸条对SEM、CPSEM、AHD、CPAHD等均不发生交叉反应性。试纸条检测方法操作简单,稳定性较高,适用于呋喃唑酮代谢物残留的现场初步筛选,也为其他兽药残留试纸条的制备提供借鉴。
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