前言 类风湿关节炎(RA)为一种自身免疫性疾病，其病理改变主要为滑膜组织的增生，炎性细胞浸润以及骨和软骨的进行性不可逆性破坏。其发病机制还不完全清楚。临床上类风湿肺受累较常见。类风湿肺损伤是由于在外界刺激因素的作用下，肺泡巨噬细胞及肺组织中炎性细胞分泌的炎性细胞因子产物增加，使肺泡变形，肺泡基底膜及小血管壁损伤，造成肺泡炎及肺血管炎性改变，激发肺纤维组织复制，合成，导致大量胶原堆积，最终形成纤维化。 研究证明RA滑膜中许多炎性细胞因子水平升高，如TNF-α，IL-1，IL-6，IL-8，ICAM-1，MMP等。而类风湿肺的发病中也有许多细胞因子及炎性介质的参与。而导致这些促炎细胞因子表达增加以及其对关节破坏作用的机制如何，已引起越来越多学者的兴趣。其中一信号传导系统-鞘磷脂通路已成为研究热点。 当外界刺激因素如TNF-α，IL-1β，生长因子等与细胞膜上的受体结合时，激活中性鞘磷脂酶(SMase)，该酶可使鞘磷脂(SM)水解为神经酰胺(CM)。CM作为第二信使，部分激活MAPK，部分激活NF-κB。 核转录因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)最初是由sen等从B细胞核提取物中发现的一种能与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κB序列(GGGACTTTCC)特异结合的核蛋白。可促进轻链基因的表达。后来发现它广泛存在于许多细胞类型中，可控制多种基因的表达。这些基因可编码细胞因子，化学趋化因子，生长因子，细胞粘附因子和一些急性期反应蛋白等。丝裂源激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)为细胞增殖和传递应激信号的关键蛋白激酶，在许多细胞因子的信号传导中起着重要的中介作用。研究表明其磷酸化可激活许多转录因子，如c-fos，c-jun及c-myc等，进而导致一些炎性细胞因子产生的增加。因NF-κB和MAPK参与许多免疫和炎症反应基因的表达，其在RA发病中的作用已引起人们的关注。其是否参与RA滑膜及肺组织病变的病理过程值得探讨。实验方法 实验一:取巧例RA初治患者及巧例健康对照者的外周血，分离淋巴细胞涂片，用免疫组织化学方法观察NF一KB的表达情况，镜下计数淋巴细胞NF一KB的核染色阳性率，并分析其与r一G，IgMRF，C3，C4及ESR有无相关性。 实验二:Wistar大鼠右后足足肠部皮内无菌注射CFA(含卡介苗7 .5m岁耐)0.1妞以制备类风湿关节炎(RA)的动物模型一佐剂关节炎(AA)。用原位杂交组织化学法研究AA大鼠滑膜中MAPKmRNA量的改变，用免疫组织化学染色法研究AA大鼠滑膜中NF一KB表达的改变。应用显微图像分析系统对其表达进行定量分析。 实验三:用westeo blot法研究AA大鼠肺组织中活化NF一KB蛋白水平，用原位杂交法进一步研究AA大鼠肺组织中NF一KBmRNA水平及其分布，用显微图像分析系统对其表达进行定量分析。实验结果 1.1认患者外周血淋巴细胞NF一KB的核染色阳性率明显高于正常对照组(p<0.01)，且与r一G，IgMRF成正相关，相关系数分别为0.577和0.656(p<0.05，p<0.01)，与C3成负相关，相关系数为一0.736(p<0.0一)，与C4及ESR无相关性。 2.镜下观察可见AA大鼠的关节滑膜衬里细胞层增厚，大量淋巴细胞浸润。关节软骨及骨内也可见大量淋巴细胞浸润及骨和软骨的破坏，亦可见血管翁形成，符合类风湿关节炎的滑膜病理改变。AA大鼠肺组织中可见肺泡上皮坏死，肺泡变形，肺泡毛细血管基底膜损伤。间质内可见淋巴细胞，浆细胞及巨噬细胞浸润。肺泡毛细血管基底部大量淋巴细胞浸润，符合类风湿肺的病理改变。 3.在AA大鼠关节滑膜中，NF一KB阳性染色程度明显强于正常对照组(p<0.01)。阳性细胞分布于滑膜衬里细胞，巨噬细胞，成纤维细胞及淋巴细胞中。胞浆及胞核内均有染色，但胞核染色较深，多呈团块状分布，而胞浆染色较浅。在正常大鼠关节滑膜中，衬里细胞及成纤维细胞中可见弱阳性染色。 AA大鼠滑膜中，P38mRNA染色阳性程度明显强于正常对照组(p<0.01)。阳性细胞主要分布于滑膜下层。包括巨噬细胞，成纤维细胞及淋巴细胞。胞浆中充满黄褐色颗粒，呈颗粒状或团块状分布，胞核偶有少量染色。而滑膜衬里层细胞染色为阴性反应。另外可见关节骨及软骨的破坏，其内可见P38mRNA反应阳性的淋巴细胞浸润。在正常大鼠关节滑膜中，成纤维细胞及巨噬细胞中可见弱阳性染色，而滑膜衬里细胞中染色阴性。通过相关性分析发现P38mRNA与NF一KB呈明显正相关(r二0.725，p<0 .01)。 4.AA大鼠肺组织活化P65蛋白(核内两5蛋白)水平明显高于对照组(p<0.01)。且AA大鼠肺组织p65mRNA表达也较正常对照组明显升高(p<0.01)。P65mRNA主要表达于肺内巨噬细胞，浆细胞以及浸人肺间质内的淋巴细胞中。可见在胞浆内充满黄褐色颗粒，呈颗粒状或团块状分布。结论 1.RA患者外周血淋巴细胞中活化NF一KB表达增加可能参与RA的发病机制，且与疾病的严重程度呈正相关。 2.AA大鼠滑膜细胞(滑膜衬里细胞，巨噬细胞，成纤维细胞及浸润的淋巴细胞)内NF一KB蛋白表达的增加可能参与滑膜的病理过程。 3.MAPKmRNA在AA大鼠滑膜