子宫内膜异位症（EM）为妇产科常见病、疑难病，近年来发病率有逐年明显增高的趋势。EM不仅是导致妇女不孕的主要原因之一，而且少数子宫内膜异位囊肿可发生恶变，对育龄期妇女的生活质量造成严重影响。 石见穿是具有活血化瘀功效的中药，本实验首次将其用于治疗EM。利用自体移植法建立大鼠EM动物模型，利用病理学、免疫病理学及分子生物学等实验手段，从光镜、电镜观察，内分泌，侵袭机制，细胞凋亡及凋亡相关基因调控角度，探讨EM的发病机制及中药石见穿治疗EM的作用机理。研究的结果及结论如下：1 子宫内膜异位症模型的成功建立本实验采用Wister大鼠自体手术移植方法建立EM动物模型，实验中对50只大鼠进行自体内膜手术移植，成瘤率为66%。经病理组织学证实，移植后的组织可见腺上皮及间质细胞，仍保持原有的组织形态，模型可靠。 <WP=106>2 石见穿对子宫内膜异位症的抑制作用从异位病灶体积的变化和组织病理、超微结构的改变探讨石见穿对EM动物模型的作用。结果显示，石见穿可使异位病灶体积缩小，甚至萎缩，能够抑制异位内膜的生长。超微结构的变化，发现模型大鼠异位内膜腺腔形态不规则，但腺体结构存在。通过电镜观察，石见穿组超微结构出现不同程度的改变，而且出现了细胞固缩，核膜皱缩，染色质浓缩边集以及凋亡小体等凋亡的形态学变化。由此提示，石见穿促进了EM异位内膜细胞的凋亡。3 石见穿对EM模型内分泌功能的影响EM是一种雌激素依赖性疾病，内分泌功能的改变将直接影响着异位病灶的转归。本实验采用放射免疫分析法（RIA）法测定显示石见穿具有降低EM大鼠FSH、LH、E2的作用，但远不及丙氨瑞林，石见穿治疗后大鼠阴道涂片仍可见周期性变化，大鼠的排卵功能并未受影响，使仍保持稳定的内分泌功能。所以，考虑石见穿治疗EM既起到了低雌激素状态抑制异位内膜生长的作用，又防止了雌激素过度低下带来的一系列副作用，很有治疗前景。4 石见穿对子宫内膜异位症粘附、侵袭、血管生成的影响现已知，异位的子宫内膜在腹腔内粘附、种植、生长的机制是EM发病的关键。本实验采用免疫组织化学染色方法，检测各组大鼠局部组织E-钙粘素（E-Cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。实验结果显示，EM大鼠异位内膜、在位内膜E-Cadherin的表达均低于正常大鼠，可见，在EM中，由于E-cadherin的表达下降，导致细胞解聚，使子宫内膜上皮细胞之间粘附作用降低，从而变得容易从正常位置解离而“异位”。石见穿和丙氨瑞林能够增强EM大鼠在位内膜、异位内膜E-Cadherin的表达。说明石见穿通过增强局部组织的粘附能力，使之不易脱落，从而减少子宫内膜的游走，减少<WP=107>EM的侵袭、转移。粘附作用下降的子宫内膜，必须降解基底膜和其它的细胞外基质（ECM）成分才能使异位内膜种植生长。MMP-2能够降解所有的ECM，实验结果表明，EM大鼠在位内膜、异位内膜MMP-2的表达高于正常大鼠，提示 MMP-2的高表达，使 ECM降解，基底膜破坏，子宫内膜及异位内膜易于穿透种植部位的ECM而获得浸润、种植的能力。石见穿和丙氨瑞林能够降低局部组织MMP-2的表达，从而降低了在位内膜、异位内膜降解ECM的作用，使其不能破坏细胞基底膜，而进一步降低其侵袭、转移、种植的能力。逆流经血中的子宫内膜细胞经过粘附和降解EMC，之所以能成功地异位种植生长，血管发生参与了EM的发生机制。实验结果表明，EM大鼠异位内膜、在位内膜VEGF 的表达均高于正常大鼠，表明EM大鼠异位病灶VEGF活性的提高，使内膜新生血管增加，可能是EM种植、生长的决定因素。石见穿和丙氨瑞林可降低在位内膜、异位内膜VEGF 的表达。阻断其血供的支持，从而抑制了局部组织的新生血管网络的形成,进一步抑制了异位内膜的种植生长。5 石见穿对子宫内膜异位症细胞凋亡及其相关基因的影响由于EM具有与恶性肿瘤相类似的侵袭、转移特性，因此考虑在EM中是否也存在细胞凋亡的抑制表现。本实验采用TUNEL法检测各组大鼠局部组织的细胞凋亡情况。结果表明，EM大鼠在位及异位内膜对凋亡的敏感性均明显下降，异位内膜较在位内膜下降更明显，进一步证实了由于异位内膜细胞的抗凋亡性较强，使其在盆腔内的生存时间延长，促成其在盆腔内种植及存活，使内异症得以发生及发展。石见穿治疗EM，使其局部组织凋亡敏感性明显增强，可见，石见穿能明显使异位病灶缩小，内膜萎缩变薄，可能通过诱导异位内膜细胞凋亡的方式来实现的。 <WP=108>细胞凋亡过程是受基因的精确调控而实现的，其中，抑制凋亡基因Bcl-2与促进凋亡基因Bax之间的比例决定着细胞对凋亡的敏感性。本实验采用原位杂交法检测各组大鼠局部组织Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达结果显示，EM大鼠异位内膜Bcl-2 mRNA均阳性表达，且多数为强阳性表达，而Bax mRNA只有少量表达，甚至不表达。可见，异位内膜细胞可通过Bcl-2基因的高表达和Bax基因的低表达而增强自身的抗凋亡的能力，使得异位内膜能够在宫腔外存活及种植，形成异位病灶。石见穿、丙氨瑞林治疗EM后，异位病灶Bcl-2 mRNA的表达下降，而Bax mRNA的表达则增强，可见，石见穿通过调节Bcl-2/Bax的表达来促进?