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实验目的： 肝移植手术过程中，肝脏缺血再灌注损伤是导致移植肝早期无功能及急、慢性排斥反应的重要原因。高迁移率族蛋白1(HMGB1)作为一种重要的炎症因子，在肝脏缺血再灌注损伤中，它既可以由坏死细胞被动释放，也可以由激活的巨噬细胞或单核细胞主动分泌到细胞外介导和参与许多炎症反应。本实验通过建立大鼠DCD原位肝移植模型，研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠移植肝中的表达，初步探讨HMGB1与相关受体信号转导通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。 实验方法： DCD大鼠模型建立，采用剪破膈肌诱导气胸并钳夹心底部诱导心脏停跳法建立。DCD大鼠供体原位肝移植模型的建立，采用改良的Kamada双袖套法行热缺血20分钟DCD供肝原位移植术。 将100只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组（20只）、正常移植组（供受体各20只）、DCD移植组（供受体各20只）。三组实验动物术前均经阴茎背静脉行全身肝素化处理。假手术组、正常肝移植组和DCD肝移植组按实验设计要求于术后1h，2h，4h，6h，12h（每个时间点处理4只）取下腔静脉血检测血清ALT水平，处死动物后取肝脏组织标本，应用RT-PCR方法检测HMGB1、TNF-a、IL-1 mRNA表达，应用Western Blot方法检测HMGBⅠ蛋白表达情况及HE染色方法评估肝脏损伤程度，并进行统计学分析。 实验结果： 1、HMGB1mRNA在肝脏组织中的表达 HMGB1mRNA水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD肝移植组高于正常肝移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。 2、HMGB1蛋白在肝脏组织中的表达 HMGB1蛋白水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD肝移植组高于正常肝移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。 3、细胞因子TNF-a、IL-1mRNA在肝脏组织中的表达 TNF-a、IL-1水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD肝移植组高于正常肝移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。 4、肝功能检测 实验动物于术后1h、2h、4h、6h及12h取血清，检测ALT水平。血清ALT水平，与假手术组相比，正常肝移植组和DCD组大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均明显升高(P＜0.05);与正常肝移植组相比，DCD组各时间点血清中ALT水平显著升高(P＜0.05)。 5、各时间点肝脏的病理变化情况 肝移植再灌注后肝脏小叶结构开始破坏，出现出血、炎性细胞浸润、水肿、脂肪变性、细胞皱缩核分裂甚至坏死、凋亡。且随着时间从1h增加到12h，肝脏损伤显著增加。DCD组肝移植后肝脏损伤在各时间点较正常肝移植后明显提前且程度更严重。 实验结论： 各组肝脏标本中均检测到HMGB1的表达，表明高迁移率族蛋白参与了移植肝缺血再灌注损伤的病理过程。DCD移植组HMGB1变化趋势与正常移植组相同，但升高程度较高。