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蛋白激酶是真核生物适应环境变化的重要信号转导因子,是信号转导通路中的重要组成部分。作为蛋白质最主要的翻译后修饰之一,蛋白的磷酸化/去磷酸化修饰在植物ABA信号中起着非常关键的调控作用。SnRK2s是植物体内响应逆境胁迫的一类蛋白质激酶,它们通过磷酸化过程级联放大胁迫信号,调控下游基因的表达。拟南芥中SnRK2s亚家族共有10个成员,主要参与植物对渗透胁迫的细胞信号传导,但其在高渗、低温、高盐等胁迫处理下的m RNA表达量如何仍不明确。SnRK2s可磷酸化蛋白质分子中的RXX(S/T)基序,在转录因子ABI5中,存在6个可被SnRK2s磷酸化的潜在基序,这些基序是否均可被SnRK2s亚家族的某一个激酶所识别并磷酸化目前还不明确。AFPs是一类能与ABI5发生相互作用的蛋白,能促进ABI5蛋白的降解。AFP2/3/4除了可以和ABI5175-221发生相互作用以外,还可以和ABI51-135发生相互作用,但SnRK2s是否能与AFPs发生相互作用尚不明确。二聚体是蛋白质与蛋白质相互作用的一种形式,二聚作用是调节信号转导的一种常见形式。AFPs家族5个成员及SnRK2s亚家族中10个成员能否形成同异源二聚体也仍不清楚。本研究主要利用q RT-PCR和酵母双杂交系统来探究上述问题,结果如下:(1)通过q RT-PCR检测了SnRK2s亚家族的10个基因在Na Cl、山梨醇、蔗糖以及低温胁迫处理下m RNA含量的变化。Na Cl浓度为50 mmol·L-1时,SnRK2.1、SnRK2.2、SnRK2.4、SnRK2.5、SnRK2.8和SnRK2.10的m RNA水平分别增长至对照的1.8、3.5、39、2、58和42倍;当Na Cl浓度上升至100 mmol·L-1时,除SnRK2.1外,其余成员的m RNA水平均有不同程度的上升,其中SnRK2.4、SnRK2.8及SnRK2.10的m RNA含量分别上升为对照的1477、1627和1395倍;当Na Cl浓度上升到200 mmol·L-1时,除SnRK2.1 m RNA水平基本不变外,其余成员的m RNA水平均有不同程度的下降。50mmol·L-1山梨醇处理后,SnRK2.4、SnRK2.8及SnRK2.10的m RNA表达量有明显上升,分别上升至对照的169、20和43倍;当山梨醇的浓度从50 mmol·L-1上升到100mmol·L-1时,SnRK2s成员m RNA水平随之升高,其中SnRK2.4、SnRK2.8及SnRK2.10的m RNA含量上升至对照的330、219和171倍,SnRK2.2从50 mmol·L-1时的5.6倍上升至10.8倍,SnRK2.5从50 mmol·L-1时的0.7倍上升至60倍;当山梨醇浓度上升至200 mmol·L-1时,除SnRK2.1及SnRK2.7的表达量上升外,其余成员的表达量均有下降。蔗糖处理对SnRK2s亚家族成员m RNA表达量影响不大。4℃低温处理拟南芥幼苗后,SnRK2.4、SnRK2.6、SnRK2.7及SnRK2.9的表达量分别上升至对照的9.7、4.7、7.6和4.3倍,其他6个基因对低温的胁迫响应不太明显。(2)构建SnRK2s亚家族成员SnRK2.1、SnRK2.4、SnRK2.5、SnRK2.7、SnRK2.8、SnRK2.9和SnRK2.10至酵母双杂交载体p GBKT7,利用酵母双杂交系统分析拟南芥SnRK2s亚家族成员与ABI5全长及其片段的相互作用:SnRK2.2、SnRK2.3、SnRK2.4、SnRK2.5、SnRK2.8和SnRK2.10均与ABI5的全长有相互作用。SnRK2.4和SnRK2.5只与ABI5的全长有相互作用;SnRK2.10及SnRK2.8除与ABI5全长有相互作用外,还与ABI5136-174片段有相互作用;SnRK2.2和SnRK2.3与ABI5的全长及其片段ABI5136-174和ABI5278-442均有相互作用。(3)构建AFPs家族成员AFP1、AFP2、AFP3、AFP4和AFP5至酵母双杂交载体p GADT7,利用酵母双杂交系统分析SnRK2s亚家族与AFPs家族成员的相互作用:SnRK2s亚家族10个成员与AFPs家族任一成员均不能发生相互作用。(4)利用酵母双杂交系统分析AFPs家族是否可形成同/异源二聚体:除AFP5外,AFPs家族的其他成员均可自身形成同源二聚体。AFP1还可与AFP2、AFP3、AFP4、AFP5形成异源二聚体;AFP2可与AFP3、AFP4、AFP5形成异源二聚体;AFP4可与AFP5形成异源二聚体。(5)构建SnRK2s亚家族成员10个成员至酵母双杂交载体p GADT7,利用酵母双杂交分析SnRK2s亚家族是否可形成同/异源二聚体:SnRK2.2及SnRK2.3能形成同源二聚体,SnRK2.1可与SnRK2.2、SnRK2.3及SnRK2.8形成异源二聚体,SnRK2.2可与SnRK2.3、SnRK2.5及SnRK2.8形成异源二聚体;SnRK2.3可与SnRK2.5、SnRK2.8形成异源二聚体;SnRK2.8可与SnRK2.5、SnRK2.6和SnRK2.7形成异源二聚体。