全细胞生物催化合成苯甲醇及其类似物

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苯甲醇和苯乙醇是具有重要应用价值的芳香醇化合物。其中,苯甲醇是常用的定香剂及油脂溶剂,苯乙醇具有清甜悦人的玫瑰花香,两个化合物均广泛地被应用于食品、医药和化妆品等行业。目前苯甲醇和苯乙醇的获取主要是通过植物直接提取或化学合成,直接提取面临产量低、成本高的问题;尽管化学合成可以获得较高的产量,但其通常需要高温高压的条件和有毒催化剂,是一种非可持续的生产方式。相比之下,生物转化利用天然微生物细胞作为无毒的生物催化剂,在温和条件下将可再生原料转化为目标产品,近年来受到了广泛关注。在本研究中,我们旨在构建有效的级联生物催化路径,进而获得高产大肠杆菌重组菌株,最终通过一锅法生物转化实现以生物来源的L-苯丙氨酸为底物生产苯甲醇和苯乙醇。因此,我们构建了具有三个酶催化模块的人工催化路径,第一个模块包含L-氨基酸转氨酶LAAD和羟基扁桃酸合成酶HmaS,此模块负责催化L-苯丙氨酸生成(S)-扁桃酸;第二个模块包含(S)-扁桃酸脱氢酶和苯乙醛酸脱羧酶,该模块能够将(S)-扁桃酸转变为苯甲醛;最后我们引入苯乙醛还原酶PAR作为还原模块,将苯甲醛高效还原为苯甲醇。将三个催化模块共同导入大肠杆菌,获得一株生产苯甲醇的重组菌,当以10 mML-苯丙氨酸作为底物时,生成1114.92 mg/L苯甲醇,转化效率接近100%。进一步的底物替换实验表明,此处构建的苯甲醇催化路径还能够以L-酪氨酸和非天然氨基酸间氟L-苯丙氨酸作为底物,从而合成相应的产物对羟基苯甲醇和间氟苯甲醇。苯乙醇生物合成通路含有两个模块:前一个模块包含LAAD和脱羧酶ARO10,此模块能够催化L-苯丙氨酸生成苯乙醛,后一个模块是PAR还原模块将苯乙醛还原生成苯乙醇。为减少产物对宿主细胞的毒性,我们采用两相催化系统来生产苯乙醇,最终将苯乙醇产量提升至24.4 g/L,转化率大于99%。总之,通过构建和组装酶级联催化模块,并将催化路径转入大肠杆菌底盘细胞,我们成功利用“一锅法”生物转化L-苯丙氨酸合成了苯甲醇和苯乙醇。由于生物催化路线简单,转化效率高,无副产物生成,因而具有良好的应用前景。未来我们将拓展本研究构建的生物催化途径从而用于合成更多高附加值化合物。
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