【摘 要】
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目的:通过观察加味大柴胡汤对2型糖尿病模型大鼠FBG、FINS、FFA、Hb A1c等血糖指标的影响,明确其治疗早期2型糖尿病的疗效,并观察给药前后肝脏组织中IRS-2、PI3Kp85、Akt关键指标的表达水平,探讨其调节糖脂代谢和改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:SPF级雄性SD大鼠70只,取10只设为对照组,其余大鼠给予高脂饲料联合链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导建立T2DM模
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目的:通过观察加味大柴胡汤对2型糖尿病模型大鼠FBG、FINS、FFA、Hb A1c等血糖指标的影响,明确其治疗早期2型糖尿病的疗效,并观察给药前后肝脏组织中IRS-2、PI3Kp85、Akt关键指标的表达水平,探讨其调节糖脂代谢和改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:SPF级雄性SD大鼠70只,取10只设为对照组,其余大鼠给予高脂饲料联合链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导建立T2DM模型。将成模后大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、加味大柴胡汤（以下简称中药）极高、高、中、低剂量组（n=10）。中药极高、高、中、低剂量组分别按中药材饮片生药46.4g/kg、17.82 g/kg、8.91 g/kg、4.45 g/kg灌胃,二甲双胍组给予0.15g/kg盐酸二甲双胍肠溶片灌胃,空白组、模型组给予等体积的生理盐水10m L/kg灌胃,1次/每天,每隔4天记录一次大鼠体重并绘制体重变化曲线,每隔5天记录一次大鼠的饮食情况并绘制饮食变化曲线图。给药治疗4周,在末次给药后禁食,次日晨起采尾静脉血检测空腹血糖（Fasting blood glucole,FBG）,麻醉后心脏采血并留取肝脏组织,称重肝脏质量,计算脏器系数。血液样本采用ELISA检测空腹胰岛素（Fasting insulin,FINS）及游离脂肪酸含量（free fatty acid,FFA）,全自动生化分析仪检测糖化血红蛋白（Hb A1c）水平;HE染色观察肝脏组织的病理变化并进行病理评分;Western blot法检测各组肝脏组织蛋白激酶B（Akt）、胰岛素受体底物2（IRS-2）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3Kp85）、p-Akt、p-IRS-2、p-PI3Kp85蛋白的表达;实时荧光定量RT-q PCR法检测肝脏中Akt、IRS-2、PI3Kp85 m RNA的表达。结果:1经干预治疗后,对照组大鼠的体重与饮食随着时间的迁延而不断增加,模型组大鼠均出现多饮、多食及消瘦等症状,其毛色变得无光泽,精神萎靡,阳性组大鼠的体重与饮食情况呈现周期性的降低与恢复,中药组的这种周期性降低得到了一定的缓解,其中,中药高剂量组及中药极高剂量组缓解情况最明显。2通过计算大鼠肝脏质量、肝脏系数和体质量,与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量、肝脏系数显著升高（P＜0.05）,体质量下降（P＜0.05）;与模型组比较,中药极高、高、中剂量组肝脏质量、肝脏系数下降（P＜0.05）,体质量升高（P＜0.05）,其中以极高剂量组下降和升高最为明显,差异具有统计学意义。3血液生化检测结果:与对照组比较,模型组大鼠血清FBG、FFA、FINS、Hb A1c的含量均升高（P＜0.05）;与模型组比较,中药极高剂量组、中药高剂量组大鼠血清FBG、FFA、FINS、Hb A1c的含量显著降低（P＜0.05）,其中以中药极高剂量组降低最为明显,差异具有统计学意义。4肝脏组织病理检测结果:对照组大鼠肝脏中细胞形态结构排列整齐,密集分布,胞质染色均一较深,没有炎性细胞浸润,无组织细胞坏死,结构清晰可见。与对照组比较,模型组大鼠肝脏细胞染色清晰,细胞排列间隙增大,胞质染色较浅,可见大量的炎性细胞浸润,组织变性、坏死,肝脏组织病理评分显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,中药极高剂量组、高剂量组肝脏中存在少量的炎性细胞浸润,细胞间隙减小,细胞排列相对微乱,肝脏组织病理评分显著降低,其中以中药极高剂量组降低最为明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5 Western blot检测结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中Akt、IRS-2、PI3Kp85、p-Akt、p-IRS-2、p-PI3Kp85蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组比较,各给药组能够升高Akt、IRS-2、PI3Kp85、p-Akt、p-IRS-2、p-PI3Kp85蛋白的表达,其中以中药极高剂量组升高最为明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6 RT-q PCR检测结果:与对照组比较,模型组AKT、IRS-2、P13K m RNA的表达显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,各给药组能够升高Akt、IRS-2、PI3Kp85、p-Akt、p-IRS-2、p-PI3Kp85基因的表达,其中以中药极高剂量组升高最为明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:加味大柴胡汤能够显著改善2型糖尿病模型大鼠的糖脂代谢、改善胰岛素抵抗和肝脏组织病理改变,其具体机制可能与加味大柴胡汤上调了2型糖尿病模型大鼠肝脏组织病理中IRS-2/PI3K-Akt信号通路关键分子的表达有关。
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