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双组分信号系统(two-component system,TCS)是细菌感知和响应环境的普遍机制,由组氨酸激酶(histidine kinase,HK)和应答调控蛋白(response regulator,RR)组成,它们能够使机体根据环境条件的改变做出适当的细胞反应。嗜根考克氏菌(Kocuria rhizophila)是一种抗生素活性测试的常用质量控制菌株,但目前有关它的TCS研究尚不多见,仅在DC2201菌株中有报道。本文以嗜根考克氏菌为研究对象,综合采用生物信息学、现代微生物分子生物学的研究方法和技术,研究嗜根考克氏菌的TCSs,具体过程和结果如下:1.通过生物信息学手段对8株序列已知的嗜根考克氏菌菌株的TCSs进行了数量、结构和功能的分析,研究结果显示嗜根考克氏菌中共存在13种TCSs,且HKs和RRs都是模块化蛋白质,参与外界压力应答、细胞壁合成、酶活性、物质代谢与运输等生命活动。2.利用酵母双杂交系统,分别以嗜根考克氏菌HK8700和RR8701为诱饵蛋白和猎物蛋白,构建真核表达载体pGBT9-HK8700和pGAD10-RR8701,通过PEG/LiAc方法先后将载体导入到酵母菌AH109,采用多重氨基酸缺陷培养基筛选,证实了HK8700和RR8701具有相互作用。3.采用PCR的方法特异性扩增嗜根考克氏菌基因hk8700*和rr8701,分别构建原核表达载体pET-29a(+)-HK8700*和pPGH-RR8701,通过添加IPTG诱导、亲和层析柱分离获得大量可溶性蛋白HK8700*和RR8701。纯化的蛋白HK8700*先进行自磷酸化反应,随后与RR8701蛋白混合发生磷酸转移现象,通过甲基绿染色显现丙烯酰胺上磷酸化蛋白,证实了HK8700-RR8701是一对TCS。4.以嗜根考克氏菌的TCS HK8700-RR8701中的应答调控蛋白基因rr8701为目的基因,以温度敏感型质粒pKC1139为载体,扩增获得rr8701上下游片段和质粒pIJ790上的氯霉素基因cat,通过融合PCR的方法获得敲除盒UCD,从而构建rr8701基因敲除载体pKC1139-UCD。以上结果对揭示嗜根考克氏菌双组分信号系统、进而构建该菌的TCS调控网络提供依据;构建的敲除载体pKC1139-UCD为探讨HK8700-RR8701的功能、建立嗜根考克氏菌的遗传转化系统奠定了基础,并可推动其在工业上的应用。