玉米花丝降尿酸因子的优选与其靶向作用研究

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本论文以玉米花丝为原料,通过优化的体外黄嘌呤氧化酶活性抑制反应条件及高尿酸血症细胞模型对其中的粗多糖和粗黄酮的降尿酸活性进行初探;分别进行纯化,对各组分的体内降尿酸作用进行评估,筛选得到降尿酸活性最好的组分;考察该组分降尿酸活性的量效关系并对其结构进行鉴定。主要研究结果如下:(1)通过响应面实验确立体外黄嘌呤氧化酶(XO)活性抑制实验的最佳反应条件,并结合高尿酸血症细胞模型对玉米花丝粗多糖(CCSP)和粗黄酮(CCSF)的降尿酸活性进行初探。最佳反应条件为XO浓度0.04 U/m L、PH 7.8、盐酸用量83μL。CCSP和CCSF均能抑制XO活性以及降低细胞模型中的尿酸含量,表明均具有降尿酸活性。(2)纯化玉米花丝粗多糖,构建高尿酸血症(HUA)动物模型探究纯化多糖组分的体内降尿酸活性。经纯化获得了玉米花丝中性多糖(NCSP)和酸性多糖(ACSP)两个组分,分子量分别为74.1和109.6 k Da。动物实验结果显示NCSP和ACSP均可减少HUA模型小鼠血清尿酸(UA)含量,降低血清肌酐(Cr)水平及血清和肝脏黄嘌呤氧化酶(XO)活性,表明在体内同样具有降尿酸作用,同时可改善肾组织损害,其中纯化组分NCSP的体内降尿酸效果更好。(3)纯化玉米花丝粗黄酮,构建HUA动物模型探究纯化黄酮组分的体内降尿酸活性。经纯化获得了两个黄酮组分,命名为CSF-A和CSF-B。CSF-A中主要为芦丁、槲皮素、芹菜素和山奈酚;CSF-B中主要为芦丁、木樨草素和山奈酚。动物实验发现玉米花丝纯化黄酮也可减少模型小鼠血清UA含量,降低血清Cr水平及血清和肝脏XO活性,表明其在体内同样具有降尿酸作用,其中纯化组分CSF-B的体内降尿酸活性更好。(4)构建HUA动物模型,考察NCSP和CSF-B体内降尿酸作用的量效关系并鉴定其结构。结果发现NCSP和CSF-B的体内降尿酸活性存在剂量依赖性,随给药浓度的增大而增强。作用机制部分与抑制XO活性减少尿酸生成,以及靶向于肾脏组织改善其损伤有关。NCSP是一种以葡萄糖为主的杂多糖,主链由4,6)-α-D-Glcp-(1→、4)-α-D-Glcp-(1→、3)-β-D-Galp-(1→、3,5)-β-D-Manp-(1→四种糖残基组成。CSF-B中含有芹菜素-6-C-葡糖苷-7-O-葡糖苷,山奈酚-3-O-芸香苷,木樨草素-7-葡糖苷,木樨草素-3′,7-二-O-葡糖苷和柚皮素,同时结构中存在C4’、C5羟基和C2=C3双键活性基团。
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