【摘 要】
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目的:探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用免疫组织化学,实时PCR和Western blotting方法检测30例喉癌中Cav3.1的喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况及差异;采用si RNA技术构建瞬转,构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的影响,采用Annexin V-PI染色
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目的:探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用免疫组织化学,实时PCR和Western blotting方法检测30例喉癌中Cav3.1的喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况及差异;采用si RNA技术构建瞬转,构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的影响,采用Annexin V-PI染色技术检测下调组喉癌细胞凋亡的影响;Western Blot实验验证凋亡蛋白表达水平。结果:1.免疫组化染色显示,30例喉癌组织中主要Cav3.1在细胞质中呈弥漫性表达,少数细胞核中也有表达,呈现淡黄色、棕黄色或棕褐色,Cav3.1阳性表达27例,Cav3.1阳性表达率为90%;对应癌旁正常黏膜组织中Cav3.1阳性表达3例,Cav3.1阳性表达率10%。Cav3.1的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜组织,差异有统计学意义（χ2=38.4,P<0.01）2.实时PCR结果显示,喉癌组织中Cav3.1的RNA表达水平（3.816±1.757）显著高于癌旁组织（1.131±0.843）,差异有统计学意义（t=7.550,P=0.000）;3.Western blotting显示,在30例喉癌样本和癌旁切缘组织中,喉癌组织中Cav3.1的蛋白表达水平（4.251±2.496）显著高于癌旁组织（1.445±1.143）,差异有统计学意义（t=5.755,P=0.0001）4.使用si-Cav3.1转染Hep-2细胞后,流式细胞技术提示转染效率92±2.31%,WB验证检测显示,si-Cav3.1组中的mi R-Cav3.1显著减少（si RNA-Cav3.1组0.4±0.08。mock0.96±0.45,NC组0.98±0.2,n=3）,si-Cav3.1组中的Cav3.1相对表达水平则显著下降（图3）,与空白对照组,mock组相比差异有统计学意义（F=18.109,P=0.0008）5.对凋亡的影响,检测24小时后凋亡率,正常组、mock组和si-Cav3.1组凋亡率分别为（1.26±0.31,2.62±0.42,25.11±2.56）,与正常组相比,si-Cav3.1组细胞凋亡率升高（F=514.5,P=0.0000）结论:1.Cav3.1在喉癌组织和喉癌细胞系中高表达。2.下调Cav3.1抑制喉癌细胞的增殖,促进凋亡。3.推测Cav3.1可能参与调节了喉鳞癌的发生发展。
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